超氧化物歧化酶(SOD)生产.pptx

项目二：超氧化物歧化酶（SOD）的生产 ;一. SOD的概况;;3.SOD的理化性质;3.3 SOD稳定性及影响因素： （1）PH、热、蛋白酶的影响：SOD在pH5.3～9.6间催化性能良好，在pH4.5～pH11间能稳定存在。pH3.6时， CuZn-SOD中95%的Zn要脱落，在pH12.2时，SOD的构象会发生不可逆的转变而使酶失活。 （2）SOD对热的稳定性与溶液中离子强度有关。当离子强度很低时,即使加热到95℃, 其活性损失也很少其他因素：SOD活性受饮料的色泽、成分、酸碱度、乙醇含量等多种因素的影响，只有在无色、近中性、无乙醇饮料中SOD活性较稳定。另外还发现有机溶剂和Cl对SOD的活性具抑制作用。 ;4.SOD的作用;二 SOD的运用;2.添加剂 国外不少高级化妆品都添加SOD， 国内也有数家工厂或公司在开发和生产SOD化妆品， 如大宝SOD密，康妮SOD、SOD康舒达霜剂等。SOD作为化妆品添加剂主要有3个优点： （1）有明显的防晒效果 （2）可防皮肤衰老，阻止紫褐质（老年斑）的形成 （3）有明显的抗炎效果，对防治皮肤病有一定效果。 国外把SOD作为食品添加剂的例子是加在口香糖和饮料中。我国贵州农学院已开发出刺梨SOD饮料。SOD及修饰过的SOD还可作为外用药膏、眼药及牙膏等的添加剂 。 ;3. 生化试剂 国外已有数家公司如Sigma公司等出售SOD试剂，国内也有厂家批量生产SOD试剂， 如中科院上海生化所东风试剂厂、南京建成生物工程研究所等。此外，SOD有可能作为某些疾病的探针， 如郭彦等人认为脑瘤组织线粒体Mn-SOD降低是转化细胞的可靠生化指标之一， 并可作为评估脑瘤分化程度的参考。 ;;三.SOD的生产;提取SOD酶;操作步骤：整个操作过程在0到5℃条件下进行。;（2）去除杂蛋白 上清液中加入0.25倍体积的氯仿-乙醇混合液搅拌15min，6000r/min离心15min，弃去沉淀，得到的上清液即为粗酶液。 （3）SOD酶的沉淀分离 粗酶液中加入等体积的冷丙酮，搅拌15min，6000/min离心15min，得到SOD酶沉淀。;（4）将沉淀溶入pH7.8，0.05mol/L的磷酸缓冲液5mL中，然后6000r/min离心15min，放弃沉淀，取上清液，用凝胶sephacylS-200进行纯化，然后超滤浓缩。 （5）用紫外分光光度计测定浓液的蛋白含量 （6）将浓缩冷冻干燥后即得成品。 ;四、SOD酶??检验;所需溶液的配制：;2、酶活性的测定： （1）连苯三酚自氧化速率的测定 在10ml试管中加入pH值为8.30的50mol/LK2HPO4-KH2PO4缓冲溶液4.50ml，在25±0.5℃的恒温水浴中保温10min，然后加入在25±0.5℃的恒温水浴中事先预热好的连苯三酚溶液（空白管用10mmol/L HCL代替），迅速摇匀倒入1cm比色皿中，以空白管为参比，在325nm下，每隔30s测1次吸光值，连续记录3min，调节连苯三酚溶液用量，将其自氧化速率控制在0.070（±0.002）D/min。经实验测得连苯三酚溶液的用量为6μ1。 ;（2）样品活性测定 在10ml试管中加入pH为8.30的4.5ml50mmol/L K2HPO4-KH2PO4缓冲溶液和一定体积的样液，在25±0.5℃的恒温水浴中保温10min，然后加入在25±0.5℃的恒温水浴中事先预热好的连苯三酚6μ1， （空白管用 10mmol/L HCL代替），迅速摇匀倒入1cm比色皿中，以空白管为参比，在325nm下，每隔30s测1次吸光值，连续记录3min，调节样液体积，使样液中连苯三酚的氧化速度控制在0.035（±0.002）D/min，记录此时样液体积。 ;五.SOD使用及生产时的注意事项;紫外分光光度法测定蛋白质含量;谢谢观看