不同甲醇流加策略对重组毕赤酵母高密度发酵生产水蛭素-微生物学报.PDF

卷 期 生 物 工 程 学 报 ! # ’() * ! +( * # 年 月 $%%$ !#$%% ’()*$+, (- .#(/%0$(,(12 ,-. $%%$ !!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!! 不同甲醇流加策略对重组毕赤酵母高密度发酵生产水蛭素的影响 周祥山 范卫民 张元兴 （华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室，上海 $%%$#0 ） 摘 要 考察了不同甲醇流加策略对毕赤酵母高密度发酵生产水蛭素的影响。溶氧控制法不能有效地防止甲醇 的过量流加。气相色谱离线检测法虽然防止了甲醇流加过量，但甲醇浓度的波动较大。利用甲醇传感器在线检测 控制甲醇的流加可维持较恒定的甲醇浓度。在流加甲醇的同时，以限制性速率流加甘油可以增加表达期间的能量 供应，提高产物的表达量。经优化后，采用甲醇甘油混合流加时细胞干重达到 !3$=D E，水蛭素活性达到$ F4 G !%4 H1ID8E，即!F0 =D E。 关键词 毕赤酵母，水蛭素，甲醇，流加，发酵 中图分类号 文献标识码 文章编号 （ ） JK#K FK H !%%%/#%3! $%%$ %#/%#4/%4 ［］ 40 ! 水蛭素是一种 个氨基酸的无糖基化多 基因工程菌，分泌表达水蛭素（ ） 。 3 L 33 QO’$/E.A 肽，约0MN，它能特异性地与凝血酶结合，是迄今为 ! ! # 培养基：种子培养基为 ,ST 培养基，发酵 ［］ ［］ ! 3 止已发现的对凝血酶抑制作用最强的抗凝药物 。 培养基为UV, 培养基 。 水蛭素能有效地预防和治疗冠状动脉疾病、静脉血 !# 方法 ［］ 栓、弥散性血管内凝血等疾病$ 。由于水蛭素不与 !# ! 流加发酵：将保藏菌种接种到#%8E ,ST 种 血小板反应，它在治疗肝素诱导的血小板减少症 子培养基中，在 ， 下培养 后， #% W $%QD89 $% L $; ［］ （ # 按 ）方面具有其他抗凝药物无法比拟的效果 。 接种量接入装 的 发酵罐中进行 OP1 !% X $E UV, E 从