细胞培养基质量控制(定稿).pptxVIP

细胞培养基的质量控制 ;前言 细胞培养基在生物制药领域的应用 国内外对细胞培养基的管理 细胞培养基的质量控制;前言;简单基础培养基;BME (Eagle’s 基础培养基);EMEM (Eagle’s 最低必需培养基);GMEM (Glasgow’s 改良Eagle’s培养基);DMEM (Dulbecco’s改良Eagle’s培养基);RPMI (Roswell Park Memorial Institute);细胞培养基在生物制药领域的应用;细胞培养基在生物制药领域的应用;细胞培养基在生物制药中的重要性;细胞培养动物疫苗;FDA对细胞培养基的管理;欧盟对细胞培养基的管理;生物制药企业对细胞培养基的要求;国内细胞培养基行业的现状;缺少相关专业学历或资质的生产和质量管理人员 生产环境简陋 检验条件不足，不具备细胞培养基产品全部质量指标的检验条件，也不具备对原材料检验的条件和能力 无最终混合的批量概念 没有实行GMP管理;没有实现行业管理 目前，培养基即不属于药品，也不属于按药品管理的辅料，国家对细胞培养基没有强制性质量标准，也未列入药品生产管理范畴; 动物细胞可以耐受的体外环境的各种成分的范围比较窄（下表），所以对与之相关的培养基的质量有必要进行严格的质量控制。; 细胞类型不同，采用的培养基类型也有差异 一般要求 ? 离子： Na, K, Ca, Mg, Cl, P, 磷酸氢根 ? 微量元素：铁，锌， 硒 ? 糖，如葡萄糖 ? 氨基酸 ? 血清; 含有激素和促生长因子 同时，含抗生素，细胞生长不需要，但用于控制细菌污染 此外，多数培养基含有pH 指示剂，酚红;一、水 二、低分子量营养物质 能量来源 六碳糖 丙酮酸盐和核榶 谷氨酰胺 营养来源（氨基酸） 维生素 离子 微量元素 脂类和磷脂前体 核酸（DNA和RNA）前体 三、无营养物质 抗生素 缓冲体系 酚红 保护剂 抗氧化剂 还原剂 ; 一、水 水质是至关重要的 水纯化方法 反渗透或蒸馏（去除主要的化学物质） 活性炭过滤（有机和无机杂质） 离子交换（微量的金属或离子） 微孔滤膜（微生物污染） 评估水的纯度 电阻 标准：25?C时，≥ 20 MΩcm; 二、低分子量营养物质 1、能量来源 6碳糖(5-20mM): 除了glucose, 也可以为细胞提供半乳糖和果糖等。在大多数细胞的膜上存在的是Glut1单糖转运载体，同时也有一定数量的Glut2,Glut3等，负责转运其他不同种类的单糖，如果添加其他种类的单糖有助于调节glucose的转运速度，降低lactate的生成，维持pH稳态。但是Glut5仅存在于一些特殊种类的细胞上，负责转运Fructose入胞。 丙酮酸盐, 核榶; 谷氨酰胺 (1-20mM) ，37度的半衰期t1/2 =8days，终产物是游离的胺类物质，具有细胞毒性; ; 2、营养来源（氨基酸） 　主要分为EAA，NEAA; 3、维生素 　　　　; 4、离子 　　　　; 5、微量元素　　　　; 6、脂肪酸　　　　; 7、核酸　　　　; 三、无营养物质 1、抗 生素 细胞生长不需要，但用于控制细菌污染 2、缓冲液 一般采用碳酸氢根（HCO3‐），与培养环境中的CO2（5－10%）共同形成缓冲体系 ; 2、缓冲液 通常会向培养基中添加有机缓冲剂HEPES（pH 7.0）; 2、缓冲液; 3、酚红 用作pH指示剂 会干扰纯化 ; 4、抗剪切力保护系统　　　　; 5、抗氧化保护剂　　　　;国家化工行业标准《哺乳类动物细胞培养基》（HG/T 3935-2007）中的七项检验指标:; 哺乳细胞无血清培养基应符合以下技术要求; 考虑到生物制品的质量和安全性对细胞培养基这种原材料的要求，个人认为，若条件许可，应增加了对细胞培养基中支原体污染、牛血清白蛋白残留量、抗生素残留量检测。; 1、澄清度检查 称取每升标示量的实验室样品，置于1L烧杯中，加水1L，搅拌至溶解，按中华人民共和国药典2010版二部附录IX B澄清度检查法进行。 2、pH值的测定 称取每升标示量的实验室样品，置于1L烧杯中，加水1L，搅拌至溶解，按中华人民共和国药典2010版二部附录VI H pH值测定法进行。 3、干燥减重的测定 中华人民共和国药典2010版二部附录VIII L干燥失重测定法进行。 取两次平行测定结果的算术平均值为测定结果，两次平行测定结果的绝对差值不大于这两个测定值的算术平均值的10%。; 4、渗透压的测定 称取每升标示量的实验室样品，置于1L烧杯中，加水1L，搅拌至溶解，按中华人民共和国药典2010版二部附录IX G渗透压摩尔浓度测定法进行。 取两次平行测定结果的算术平均值为测定结果，两次平行测定结果的绝