课件：皮肤科细胞培养及临床应用.ppt

毛发用化妆品 以毛根鞘上皮细胞为对象, 进行护发活性物质的筛选以及毛发用化妆品毒性测试研究。 基础研究 皮肤三维培养(重建表皮、真皮类似物) ---化妆品和洗护发产品对人体皮肤的刺激性 研究 ---重建表皮可用于研究表皮终末分化以及研 究表皮细胞分化调节物、表皮对刺激反应 机制；化妆品经皮吸收和化妆品对屏障功 能的保护作用 ---真皮类似物用来研究真皮层的组成及生理 功能 ---重建表皮+真皮类似物共培养系统用来研究 皮肤生理代谢、化合物的光毒性、ＵＶ效 应和防晒剂的作用 体外细胞培养模型 角质形成细胞 黑色素细胞 朗罕氏细胞 成纤维细胞 皮脂细胞 细胞培养评估方法及指标 评估目的 细胞模型 评估指标 毒性 2,3-Ｄ细胞培养 细胞形态, 细胞活性 (中性红　MTT,LDH,PEG2) 美白 黑素细胞培养 黑素的生成 黑素细胞和 酪氨到酶活性 角朊细胞共培养 3-Ｄ细胞培养 抗衰老 成纤维细胞培养 细胞增殖, 胶原蛋白, 角朊细胞培养 弹性蛋白, 3-Ｄ细胞培养 粘多糖等的生成 在基因工程药物血药浓度测定中的应用 特定依赖细胞株培养法 以药物对特定依赖细胞的增殖或抑制、细 胞数目的增减为量效指标。 细胞增殖法 : 促进特定依赖细胞株增殖, 抑制增殖法: 抑制细胞增殖 细胞培养量效指标的测定方法 [3H]-胸腺嘧啶脱氧核苷掺入法(3H-TdR) 59Fe核素标记法 四氮唑盐法(MTT) 直接计数法 其他间接法 细胞毒性的观察方法 放射性同位素摄入法 3H-胸腺嘧啶-- 3H-亮氨酸--培养基中掺入3H-亮氨酸，根据 3H-亮 氨酸在细胞内含量测定细胞内蛋白质合 成情况 。 同位素法特点 揭示细胞分子水平的动态变化,是研究细胞代谢 状态的重要手段。 放射性损害。 需要特殊实验室和特殊设备。 四甲基偶氮唑盐比色法(MTT法) 荧光染色法 乙酰乙酸荧光素法 当细胞受到损伤时,细胞膜的选择通透性 屏障作用消失,利用乙酰乙酸荧光素和溴化 乙锭快速进出细胞膜受损的细胞特点。在 荧光显微镜下迅速区分受损细胞。 发光细胞活力测试 采用一种独特的、稳定性荧光素酶来检测有活力 细胞。荧光素酶利用荧光素、氧和ATP作为反应底 物，产生氧化荧光 素，并以光的形式释放能量。由