环状的双链DNA分子.pptVIP

* * 实验一 质粒DNA的提取——碱裂解法 一 实验目的 了解质粒的特性及其在基因工程中的应用。 掌握碱裂解法分离质粒DNA的基本原理和操作要点。 质粒是一种染色体外能够稳定遗传的因子，具有双链共价闭环结构的DNA分子。是染色体外小型（1-200kb）的共价、闭合、环状的双链DNA分子（cccDNA），能自主复制并能稳定遗传的遗传因子。 常常编码一些对宿主有利的酶的基因，这些基因的表型包括抗生素抗性、产生抗生素、限制酶、修饰酶等 质粒的复制：严紧型复制（1-n个） 　　　　　　　 松弛型复制（20个以上） 培养细菌使质粒扩增 收集和裂解细菌 分离和纯化质粒DNA 共价闭环DNA（cccDNA） 线状DNA（lcDNA） 开环DNA（ocDNA） 三个基本步骤 质粒存的形态 二 实验原理 碱裂解法利用宿主菌巨大线状染色体DNA与相对较小的闭环双链质粒DNA的结构的差异来提取质粒DNA。 碱变性DNA时，线状基因组DNA变性充分而质粒DNA处于拓扑缠绕的自然状态而不能彼此分开。当去除变性条件时（酸中和），质粒DNA迅速准确配置重新形成完全天然超螺旋状分子，而难于复性的长链线状的基因组DNA则与破裂的细胞壁、细菌蛋白相互缠绕成大型复合物，被S