烟叶和烟叶提取物中茄尼醇的测定.doc

ICS FORMTEXT 65.160 FORMTEXT B 35 中华人民共和国国家标准 GB/T FORMTEXT XXXXX— FORMTEXT XXXX FORMTEXT FORMTEXT 烟叶及烟叶提取物 茄尼醇的测定 高效液相色谱法 FORMTEXT Determination of solanesol in tobacco leaves and the extracts of tobacco leaves High performance liquid chromatography method FORMTEXT （在提交反馈意见时，请将您知道的相关专利连同支持性文件一并附上） FORMDROPDOWN FORMTEXT FORMTEXT XXXX - FORMTEXT XX - FORMTEXT XX发布 FORMTEXT XXXX - FORMTEXT XX - FORMTEXT XX实施 GB/T XXXXX—XXXX PAGE \* MERGEFORMAT 6 前言 本标准按照GB/T 1.1-2009和GB/T 20001.4-2001给出的规则起草。 本标准由国家烟草专卖局提出。 本标准由全国烟草标准化技术委员会(SAC/TC144)归口。 本标准由中国国家标准化管理委员会批准。 本标准起草单位：福建省农业科学院中心实验室、福建省三明金叶复烤有限公司。 本标准主要起草人：潘葳、刘文静、罗钦、张望兴、涂杰峰、余华。 本标准为首次发布。 烟叶及烟叶提取物茄尼醇的测定 高效液相色谱法 范围 本标准规定了烟叶及烟叶提取物中茄尼醇（游离茄尼醇和总茄尼醇）含量的高效液相色谱测定方法。 本标准适用于烟叶及烟叶提取物中茄尼醇含量的测定。 本方法测定烟叶及烟叶提取物中茄尼醇含量的检出限为1.00mg/kg，定量限为3.00 mg/kg。 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法。 原理 正己烷提取烟叶中游离茄尼醇（测定总茄尼醇时需皂化），用水除杂离心，取上清液流动相稀释定容，微膜过滤后高效液相色谱仪测定，外标法定量。 试剂与材料 除另有规定外，所用试剂均为分析纯，水应符合GB/T 6682中二级水的要求。 4.1 正己烷（C6H14）。 4.2 氢氧化钠（NaOH）。 4.3 甲醇(MeOH)。 4.4 异丙醇（C3H8O），色谱纯。 4.5 甲醇(MeOH)，色谱纯。 4.6 乙醇(EtOH）。 4.7 茄尼醇标准品，纯度≥99%。 4.8 茄尼醇标准储备溶液（0.50mg/mL） 准确称取50mg茄尼醇标准品（4.7），精确至0.0001g，置于100mL棕色容量瓶中，用正己烷（4.1）溶解并定容至刻度，混匀。标准储备溶液避光保存于4℃ 4.9 流动相：甲醇（4.5）：异丙醇（4.4）= 70：30（体积比），用前过0.2μm滤膜（5.8）。 4.10 茄尼醇标准工作溶液 准确移取0.1mL、1mL、2mL、3mL、4mL、5mL茄尼醇标准储备溶液（4.8）于不同50mL棕色容量瓶中，用流动相溶液（4.9）稀释并定容至刻度，得到系列标准工作溶液（质量浓度分别为1 μg/mL、10 μg/mL、20 μg/mL、30 μg/mL、40 μg/mL、50 μg/mL）。该茄尼醇标准工作溶液应即配即用。 4.11 0.02mol/L NaOH乙醇溶液 称取0.4g氢氧化钠（4.2），溶于乙醇(4.6)中，用乙醇(4.6)定容至500mL容量瓶，摇匀，即配即用 仪器和设备 5.1 高效液相色谱仪：配有紫外检测器或二极管阵列检测器。 5.2 超声波清洗器：超声波频率40KHz，或相当的设备。 5.3 恒温振荡器：可水浴加热（0℃～100 5.4 离心机：不低于4000r/min，或相当的设备。 5.5 电子天平：感量0.0001g。 5.6 涡旋振荡器。 5.7 粉碎机：转速24000r/min，或相当的设备。 5.8 滤膜：0.2μm，直径25mm的聚砜膜或相当者。 5.9 电热恒温干燥箱。 操作步骤 6.1 样品前处理 烟叶 6.1.1.1 试样制备 从样品各部分随机抽取一部分烟叶，用软毛刷将烟叶上的细土和砂粒刷去，将烟叶剪成片或切成丝。将烟叶放人烘箱中，在不高于40℃的电热恒温干燥箱中烘干，直至可用手指捻碎。从干燥箱中取出烘好的烟叶，马上研磨，持续研磨时间不应超过2min。然后过筛，未过筛的细脉应重新研磨过40目 注 :研磨时间过长会造成样品温度升高，可能引起茄尼醇逸失。 将过筛粉末立即装人洁净干