DNA的粗提取和鉴定.ppt

2.（2007年高考生物试题） 在某些深海鱼中发现的抗冻蛋白基因，该对提高农作物的抗寒能力有较好的应用价值，该基因可以从这些鱼的DNA中扩增得到。试述在提取和纯化DNA时影响提纯效果的因素及其依据。（列举两点） 6.DNA在 NaCl溶液中的溶解度有两重性，随着 NaCl溶液浓度的变化而变化。 (1)请在下列浓度的 NaCl溶液中，选出能使DNA析出最彻底的一种和溶解度最高的一种__________。 A．0.14 mol/L　　　B．2 mol/L C．0.15 mol/L D．0.3 mol/L (2) DNA不溶于酒精，但细胞中的某些物质却可以溶于酒精溶液，利用这一原理可以__________，可以推测溶于酒精中的可能有_______________ 。 * 课题 DNA的粗提取与鉴定 染色体成分 蛋白质 RNA(少量) DNA 1.提取DNA的基本思路： 利用DNA与RNA、蛋白质和脂质等在物理和化学性质方面的差异，提取DNA，去除其他成分。 ⑴ DNA的溶解性 DNA和蛋白质等成分 在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同 利用这一特点， 选择适当的盐浓度 就能使DNA充分溶解， 而使杂质沉淀； 或者让其他成分溶解， DNA析出 2.DNA等大分子的理化性质 ⑵ DNA不溶于酒精溶液 ⑶ DNA对酶、高温和洗涤剂的耐受性 DNA不溶于酒精溶液， 但细胞中某些蛋白质则溶于酒精。 将DNA与蛋白质进一步分离。 ⑵ DNA不溶于酒精溶液 ⑶ DNA对酶、高温和洗涤剂的耐受性 ① 蛋白酶——水解蛋白质， 对DNA没有影响 ② 高 温——大多数蛋白质不能忍受60～80℃ 而DNA在80℃以上才会变性 ③ 洗涤剂——溶解细胞膜，去除脂质和蛋白质 但对DNA没有影响 3.DNA的粗提取与鉴定 1．原理、方法和目的 鉴定DNA 加入二苯胺，并沸水浴 DNA可被二苯胺染成蓝色 DNA析出，除去溶于酒精的蛋白质 加入冷却酒精(95%) DNA不溶于酒精溶液 嫩肉粉中含木瓜蛋白酶，水解蛋白质（酶的专一性） 加入嫩肉粉 DNA不被蛋白酶所水解 ①NaCl溶液为2 mol/L时，DNA溶解，而部分蛋白质发生盐析生成沉淀，通过过滤可除去部分蛋白质及不溶于NaCl溶液的杂质 ②当NaCl溶液稀释至0.14 mol/L时，DNA析出，过滤可除去溶于NaCl溶液的部分蛋白质和其他杂质 溶于NaCl溶液中并稀释 DNA在不同浓度的NaCl溶液中的溶解度不同，在0.14 mol/L的NaCl溶液中的溶解度最低 目的 方法 基本原理 高温 DNA耐高温 DNA和蛋白质对高温耐受性不同：蛋白质、DNA热稳定性不同。大多数蛋白质不能忍受60～80℃的高温，而DNA在80℃以上才会变性。 DNA对洗涤剂耐受性 洗涤剂能够瓦解细胞膜，但对DNA没有影响。 加入洗涤剂 1）不同浓度NaCl中DNA溶解度不同。 2）DNA与其他细胞成分在酒精中溶解度不同，DNA不溶于酒精，细胞中某些蛋白质则溶于酒精。 3）DNA和蛋白质对酶耐受性不同：酶的专一性——蛋白酶水解蛋白质。但是对DNA没有影响。 4）DNA和蛋白质对高温耐受性不同：蛋白质、DNA热稳定性不同。大多数蛋白质不能忍受60～80℃的高温，而DNA在80℃以上才会变性。 5）DNA和蛋白质对洗涤剂耐受性不同：洗涤剂能够瓦解细胞膜，但对DNA没有影响。 提取DNA的原理包括DNA的 两个方面 溶解性和耐受性 1.DNA的粗提取实验原理 2.实验材料①动物 鸡血细胞液的优点 提醒：人和哺乳动物成熟的红细胞中不含细胞核，也没有DNA，不适于作为DNA提取的材料，但却是提取血红蛋白的理想材料。 鸡血红细胞、白细胞中都有细胞核，含大量的DNA,既经济又易取 ②植物：新鲜菜花、蒜黄、菠菜等。 3、方法与过程 1).制鸡血细胞液 0.1g/mL柠檬酸钠100mL 活鸡鲜血180mL 500mL烧杯中，玻棒搅拌，离心或静置沉淀。 离心或静置后去掉上清液 血浆 血细胞 方法步骤 加入物质 目的 1 . 制备鸡血细胞液 柠檬酸钠溶液 ① 2 . 提取鸡血细胞细胞核物质 20 m1 蒸馏水 ②幻灯片 18 3 . 溶解细胞核内的 DNA 2 m1 ／ L 的 NaCI 溶液 40 mL ③幻灯片 18 4 . 析出含 DNA 的黏稠物 蒸馏水 ④ 5 . 滤取含 DNA 的黏稠物