3D中空纤维细胞培养系统.PDF

3D 中空纤维细胞培养系统 蠕动泵、培养筒、培养基储液瓶通过导管连接构成一个连续流动的体系。 中空纤维作用类似于微血管，纤维直径大约200μm，并可选择不同通透率的纤维。 培养基流经中空纤维内部，而细胞培养在纤维内或外；在培养的细胞与流动的培养基之间形成一个半透膜的屏障。乳酸、葡萄糖等 小分子可以自由穿透纤维。 立体几何形纤维适用于贴壁与悬浮细胞培养。 细胞生长在中空纤维外时，分泌的产物如单克隆抗体与蛋白质等大分子聚集在小体积的ECS（Extracellular space，纤维管外空间） 中，浓度可高于平板或滚瓶培养100倍。 细胞接种于 针对高密度培养优化的 纤维外空间 CDM-HD，为化学成分 适合于连续收集 限定的血清替代物 高浓度细胞分泌物 培养基在中空纤维生物反应器 （Hollow fiber bioreactors, HFBR）中不断循环以提供营养 物质和氧气，同时带走废物和CO2 细胞周围的独特环境 封闭的生物安全系统 受到纤维截留分子量 符合cGMP标准 (MWCO)的控制 细胞附着在多孔支架上减缓细胞分裂 降低细胞对血清的要求 可连续培养数月或以上 易于适应无血清培养 改善细胞功能及所分泌的产物，如蛋白质折叠和翻译后修饰 增加细胞分泌产物浓度10-100倍 建立稳态、更类似于体内生长条件 在高密度生长条件下，细胞拥有最类似 渗透出废弃物与细胞抑制因子 于体内细胞生长方式 封闭系统提高生物安全 不需传代，提高细胞活率，减少细胞凋亡 适用于悬浮细胞与贴壁细胞培养 11 单位时间可处理大量细胞（高达10 ） 操作简便，每次换液仅需5分钟 1 中空纤维细胞培养系统是干细胞与293细胞等生产外泌体的理想反应器。由于外泌体不能透过纤维，可收获高浓度的外泌体，并且细胞碎片显著 降低。外泌体还能长时间持续收获，保持活性不变。 使用培养瓶生产外泌体时，需加入血清，因而存在外源外泌体与蛋白杂质，最终产物需要纯化。而细胞在FiberCell系统中培养时，循环培养基 中的外泌体不会进入细胞生长的空间，并且该系统也易适用于无血清环境，或使用血清替代物（CDM-HD，FiberCell）培养，从而得到高纯度 与高浓度的外泌体 ，中型培养筒的单次收获相当于200-250个T175 flask。 Ａ Ｂ C 中空纤维富集的外泌体，纯化后以NTA分析（A）和透射电镜（B）验证其物理特性。相较于平盘培养，中空纤维可以更有效地富集外泌体（C）。 培养瓶及C2011中型培养筒培养MS