DNA甲基化和肿瘤的关系.ppt

DNA 甲基化与肿瘤 一、DNA甲基化与基因表达 5-甲基胞嘧啶是天然存在的修饰碱基，甲基化的mCpG ，在DNA 双链中对称出现。哺乳类动物基因组约60 %的表达基因5′端启动子存在未被甲基化的CpG岛,而启动子区域外的CpG岛大都为mCpG。 正常情况下，非活化的X染色体、印迹基因等的启动子区域的CpG岛为甲基化状态，而看家基因的CpG岛则是去甲基化状态。 DNA 甲基化状态与基因表达呈负相关。其调控作用主要在转录水平抑制基因表达。 二、DNA甲基化与肿瘤 以往的研究认为癌基因激活、抑癌基因失活主要是基因突变、缺失导致的DNA 序列改变。在肿瘤研究中，检测到许多肿瘤的重要基因并未发生突变、缺失， 基因表达的异常主要通过DNA 甲基化实现。癌基因的去甲基化和抑癌基因的甲基化状态，可导致癌基因激活、抑癌基因的失活。 癌基因的低甲基化和抑癌基因的高甲基化改变是肿瘤细胞的一个重要特征。 DNA 甲基化状态的改变导致基因结构和功能的异常，与肿瘤发生的关系是近年来研究的热点。 三、乳腺癌中基因的甲基化 1. ER基因　ER的表达与否是乳腺癌激素治疗的一个肿瘤标记物。 ER基因启动子和1号外显子上分布有CpG岛。乳腺癌中ER失表达是经常性事件,约1/3的乳腺癌患者初诊时ER表达阴性；相当一部分的乳腺癌患者随着肿瘤病情的进展, ER由阳性变成阴性。 基因组的改变, 在ER基因失表达中作用不大。近来的研究认为, ER基因的甲基化异常是其失活的主要机制。 2.PR 基因 PR 基因1号外显子上分布有CpG岛。该基因编码两种同源性的蛋白质hPRa和hPRb。二者的区别在于N-末端序列和生物活性。hPRb的转录需要ER激活,而hPRa不必。Southern印迹杂交及MS-PCR法分析PR表达阴性的原发性乳腺癌及乳腺癌细胞株,约40%的PR基因启动子甲基化。 应用DNMT1抑制剂5-aza-Dc和雌激素作用于PR阴性的乳腺癌细胞株MSA-MB-231, PR基因启动子部分去甲基化且基因重新表达。 5.P16INK4a/CDKN2A/MTS DNA 甲基化在抑癌基因失活中起着重要的作用。P16INK4a 编码的蛋白是细胞周期依赖性激酶4 的抑制物(CDKI4) ,通过Rb蛋白的磷酸化/去磷酸化作用调节细胞G1 →S 期的转化。该基因转录产物是P16INK4a与P19ARF 两种蛋白。P16INK4a失活存在于大多数肿瘤中,但是乳腺癌中纯合性缺失、点突变极低，分别为1.9%和1.0%。有20%～30%的原发性乳腺癌及乳腺癌细胞株T47-D、HMECs、ZR75-1检测到5′端启动子和1号外显子的甲基化情况。在40例浸润性导管癌占30%发生P16INK4a基因甲基化，与肿瘤分级、淋巴结转移有关。 6.候选抑癌基因脾酪氨酸激酶syk启动子甲基化与乳腺癌发生和转移的关系 在细胞的信号传导途径中,酪氨酸激酶起着很重要的作用。syk在造血细胞上广泛表达, 作为信号传导过程中一个影响因子而被广泛研究。B 细胞抗原受体(BcR)激活以后,依赖syk 的信号传导途径调节B 细胞的克隆表达, 分化和凋亡。磷脂酶C(PLC)-γ2 和磷脂酰肌醇3 激酶(PI3-K) 是syk 的关键靶位。B 细胞内PLC-γ2 syk的磷酸化导致ERK 和JNK激酶活性的下降,相反,通过syk 介导Akt 激活可致PI3-K磷酸化。国外研究认为syk,在T 细胞分化成熟过程中也起着很重要的作用采用。 7. 乳腺癌Nm23-H1 转移抑制基因 Nm23-H1基因的启动子有2个 CpG岛。DNA 甲基化抑制剂 5-Aza-CdR，使11个乳腺癌细胞系中5个细胞系的Nm23-H1 表达升高，其中3个有转移能力。 Nm23-H1表达升高的同时细胞系体外转移能力下降。 8. hDAB2IP （人DOC-2/DAB2 interactive protein ） hDAB2IP 肿瘤抑制基因是 Ras GTPase活化家族的新成员。 乳腺癌、前列腺癌中，hDAB2IP 甲基化率高，与表达负相关，甲基化状态在 hDAB2IP 基因失活中起关键作用。 5-aza-2-deoxycytidine处理 后，基因表达恢复。 hDAB2IP 的启动子区分成m2a 和 m2b。 m2a区甲基化异常：25个乳腺癌细胞系中，有11个，占44%。39个原发乳腺癌中有15个，占 38%； m2b区甲基化异常：25个乳腺癌细胞系中，有12 个，占48%。39个原发乳腺癌中有13个，占 33%。 m2b区甲基化异常和乳腺癌淋巴结转移有关 。 9.其它基因的甲基化 14-3-3σ基因PHME1(human mammary epithelial 1) 、