化学发光常见问题高集锦 107问.doc

ACCESS化学发光常见问题 Beckman Coulter ACCESS? 系列全自动微粒子化学发光 免疫分析系统 常见问题及答疑 目录 第一部分：化学发光基础知识 第1--17问 第二部分：仪器应用部分 第18--74问 第三部分：项目应用部分 第75—107问 第一部分：化学发光基础知识 1 什么是化学发光，与放免、酶免比较有何不同？ 化学发光免疫分析（Chemiluminescence Immunoassay，CLIA）是将化学发光与免疫反应相结合，用于检测微量抗原或抗体的一种新型标记免疫测定技术。 化学发光免疫分析比放射免疫，酶联免疫具有更高灵敏度，具备操作简便、快速的特点，易于标准化操作。且测试中不使用有害的试剂，试剂保存期长，应用于生物学、医学研究和临床实验诊断工作，成为非放射性免疫分析法中最有前途的方法之一。 （1）与放免（RIA）产品比较 　　 与放射免疫试剂（RIA）比较，化学发光避免了放射性核素的污染以及对操作人员的伤害，大大缩短了反应时间，同时兼具高灵敏度的优势。 （2）与酶免（ELISA）产品比较 灵敏度与可测范围远远高于酶免产品，兼具ELISA法简便的操作方法与较短的反应时间。 2 什么是标记免疫技术，它的三大要素是什么？ 将Ag或Ab用标记物(如荧光素、酶、放射性同位素、化学发光物质等)进行标记，在与标本中的相应Ab或Ag反应后，可以不必测定Ag-Ab复合物本身，而测定复合物中的标记物，通过标记物的放大作用，进一步提高了免疫技术的敏感性。 三要素：通常在检测系统中会使用到一种叫标记物（labeling）的物质,常标记在抗体上 通常会有一个分离（separation）的过程在最后读取信号前 需要去仔细关注一下分析的模式（format） 3 标记免疫技术主要有哪几种？ 主要经历了四种标记免疫技术的发展：荧光素(Fluorophores) – FIA 放射性同位素(Radioisotopes) – RIA 酶(Enzymes) – EIA 化学发光物质 - CLIA 4 ACCESS化学发光原理？ 分析方法及过程 ACCESS系统采用磁性微粒作为固相载体，以AMPPD作为发光剂，固相载体的应用扩大了测定的范围。以竞争法、夹心法等免疫测定方法为基础。试剂包装采用特殊的设计，每个试剂包有5个小室分别把不同的试剂分开，减少了交叉污染，保证了检测质量。 ⑴、抗原抗体结合：将包被单克隆抗体的顺磁性微粒和待测标本加入反应管中，标本中的抗原与微粒子表面的抗体结合，再加入碱性磷酸酶标记的抗体，经温育后形成固相包被抗体-抗原-酶标记抗体复合物。 ⑵、洗涤、分离：在电磁场中进行3次洗涤，很快将未结合的多余抗原和酶标记抗体洗去。 ⑶、加入底物AMPPD发光剂：AMPPD被结合在磁性粒子表面的碱性磷酸酶的催化下迅速去磷酸基因，生成不稳定的中介体 AMPD。AMPD很快分解，从高能激发态回到低能量的稳定态，同时发射出光子，这种化学发光持续而稳定，可达数小时之久。通过 光量子阅读系统记录发光强度，并从标准曲线上计算出待测抗原的浓度。 化学发光项目的免疫学原理？· 抗原、抗体特异性结合· 小分子采用(一步、二步)竞争结合法： 一步竟争法：Total T4, Cortisol, T Uptake, Digoxin, Theophylline, Total T3 二步竟争法: FT4, B12, Folate, FT3 大分子采用(一步、二步)夹心法：?hCG， hTSH ，Ferritin， Prolactin ，PSA ， CEA， hFSH hLH IgE 一步和二步分析法是怎么回事？ 同步和分步是按照：试剂/样品加入的顺序，孵育的次数(步骤)，清洗分离的次数(步骤)来区分的，像一步分析法是试剂和样品同步加入，进行一次孵育一次清洗。像二步分析法是先加入样品进行孵育和清洗后再加入试剂，进行第二次孵育和清洗。 什么是钩状效应（hook effect），如何判断及解决？ 免疫测定的实质是抗原抗体反应，抗原抗体反应是按一定的分子比例结合，当二者比例适中时，形成的免疫反应最强烈，形成复合物或检测的信号与所测的抗原或抗体成比例关系，但当抗原或抗体其中一者过量时，免疫反应将减弱，测定值呈现假性低值。 在化学发光中像二步分析法一般都能避免钩状效应，对于一步夹心法项目说明