利用异源精子激发雌核发育的银鲫及亲本的RAPD分析-水产学报.PDF

第23 卷第4 期 水　产　学　报 Vol.23, No.4 1999 年12 月 JOURNAL OF FISHERIES OF CHINA Dec., 1999 　 利用异源精子激发雌核发育的银鲫 及亲本的RAPD 分析 RAPD ANALYSIS OF GYNOGENEIC CRUCIAN CARP ACTIVATED BY HETEROLOGOUS SPERM AND THEIR PARENTS 滕春波　孙孝文　沈俊宝　阎学春　梁利群 (中国水产科学院黑龙江水产研究所, 哈尔滨　150070) TENG Chun-Bo, SUN Xiao-Wen, SHEN Jun-Bao, YAN Xue-Chun, LIANG Li-Qun (Heilongj iang R iver Fishery Research Institute, Chinese Academy of Fishery Science, Harbin 　 50070) 关键词　　雌核发育, 方正银鲫, 随机扩增多态DNA 分析 KEYWORDS　　Gynogenesis, Fangzheng Crucian Carp, RAPD Analysis 　　方正银鲫是黑龙江水系营天 雌核发育的两性型种群, 这已被许多研究结果证实。但是从八十年代中期 以来, 国内一些研究者对该鱼的雌核发育特性, 提出了不同的看法。一般认为银鲫的雌核发育机制同种或异 种精子进入卵子后只刺激其发育, 并不发生雌雄原核的结合, 精子进入卵子后固缩成致密状态, 并不形成雄性 原核。也就是说子代的发育只是在雌原核的参与下进行的, 子代完全继承母本的遗传特性[沈俊宝等 983]。 但 983 年蒋一王圭等用鲫、红鲫和兴国红鲤的精子刺激银鲫卵子发育, 发现其子代(称异育银鲫)的生长较母本 不同程度加快了, 个别个体鳞被出现红斑, 同工酶谱染色反应表现较母本快的特点等。 因此, 他们认为异源精 子不仅可以刺激银鲫卵子的发育, 而且对子代的生长等也有影响, 并把这种现象称为“异精生物学效应”。后 来, 丁军等[ 993] 应用DNA 杂交技术, 发现虽 异源精子进入银鲫卵子后呈固缩状态, 但父母本之间仍发生 了有限DNA 片断的杂交。陈洪等[ 993]应用 RAPD (随机扩增多态 DNA)技术通过对方正银鲫、野鲤及其子 代(各一尾)的分析也发现子代中有与父本相同的DNA 条带。不过楼允东等[ 99 ] 对也具有雌核发育特性的 淇河鲫(母本)与兴国红鲤(父本)杂交子代的血清生化指标的分析, 结果发现子代与母本无明显差异, 而与父 本差异则十分显著。 因此, 认为异源精子对雌核发育银鲫卵子只起刺激作用, 不产生“异精效应”, 异育淇鲫及 其双亲同工酶的比较研究也表明异源精子并没有参与雌核发育子代的遗传, 父本基因对子代无影响[张英培 等 990]。八十年代以来, 我们对“异精效应”现象曾做过较多的实验观察和池塘实验, 并未找到异精生物学 效应的充分证据。 因此, 进一步探讨银鲫的雌核发育特性, 受精生物学以及异精对子代的影响等问题, 是十分 必要的。我们也采用RAPD 技术对异精生物学效应进行深入的研究, 通过三年来的工作, 得到了不同的结果, 现将结果报道如下。 　材料与方法 .　实验鱼 　　亲本荷包红鲤(♂)、方正银鲫(♀)及雌核发育子代(♂、♀)均由本所育种室提供。 国家自 科学基金项目,号。 收稿日期:1997-07-14 　4 期　　　　　　滕春波等:利用异源精子激发雌核发育的银鲫及亲本的RAPD 分析 42 1 .2 　基因组DNA 的提取 　　父母本剪取鳍条。雌核发育子代解剖取其肝脏。 将所取的鳍条和肝脏用组织裂解液0.5M EDTA (pH 8.0)、200μg/ml Proteinase K、0.5%Sarcosyl 于55 ℃消化过夜。随后消化液用酚、氯仿、异戊醇(24 ∶24 ∶)抽提 三次, RNaseA 消化去除RNA, 样品DNA 再抽提一次后用2L 50mmol/L TrisHcl(pH 8.0)、 0mmol/L EDTA (pH 8.0)