第5章 植物细胞制药(二).ppt

节影响植物次级代谢产物累积的因素 ;一、外植物选择;二、培养条件的影响;（2）基本培养基组成 基本培养基的各种成分是愈伤组织和悬浮培养细胞生长的物质基础，尤其在稳定期次级代谢产物累积时更是如此。 ① P ： 低于基本培养基的含磷最常常导致次级代谢产物的累积，而缺乏磷又可导致生物量的大幅度降低。 ② N ： 氮源对细胞生长表现出很大差异；含氮化合物的数量和种类对次级代谢产物的合成有很大影响；氮尚可直接调节某些代谢过程。 ③Cu ： 重金属Cu元素是次级代谢产物累积的必要元素。在相对较高但又无毒的浓度下，铜还可作为一种非生物诱导子使用，此作用为一种应激效应，经过几次继代后效应消失。 ;（3）碳源 碳源（CO2、糖类）的性质和数量往往对培养细胞的生物量有很大的影响。 CO2可诱导出某些特征反应 异养培养中，使用最多的碳源是糖类，对次级代谢产物的影响主要取决于所使用的糖类的种类和浓度及其次级代谢产物的生物合成过程。 糖的作用可能为：①延长稳定期；②通过蔗糖的分解后产物所产生的对内源性生物素合成的抑制作用；③增强戊糖磷酸代途径有关酶的活性;（4）植物生长调节剂 植物生长调节剂的合适剂量及作用须根据植物材料和生理状态而定。 不同植物激素及其不同组合形式均可显著影响代谢产物的产生。;（5）O2和pH ① O2 培养细胞生长过程中需供氧，一般使用含5% CO2 洁净空气。 通气量应适当，过多或过少均影响细胞生长及次级代谢产物的合成。 ② pH 一般来说，最有利于培养细胞生长的pH在5～6之间。 在某些情况下，氢离子浓度可直接影响次级代谢产物的产生。;（6）渗出物 在细胞悬浮培养后期，培养液中常含有各种代谢产物，如某些初级代谢产物和次级代谢产物以及某些酸性物质、醇类和水解蛋白或活性蛋白等。 次级代谢产物的累积往往在水解酶活性增加之前进行。;2. 两步培养法;3. 培养环境的外部因素;第六节 植物细胞培养的生物反应器;植物生物反应器;根据通气和搅拌系统的类型可将生物反应器分为以下几类： 摇瓶，通过机械的简单振摇达到拌目的。 搅拌型生物反应器，根据搅拌部件的外形和结构而分类，优点是可灵活运用各种搅拌器，有利于培养物的高度混合；缺点是高耗能，且严重损伤植物细胞。 环流生物反应器和鼓泡塔生物反应器，依靠外部循环泵或压缩空气作为其能量输入，使反应器内的培养基上下混合翻动。;植物细胞生产率的提高，除了高的细胞浓度外，还要求细胞具有高活力，以合成所需产物，而这正是大规模培养的难点所在。 剪切和混合不仅影响化学环境，而且对细胞聚集和生理活动也有影响。 植物细胞生物反应器的放大设计首先考虑植物细胞的剪切力，植物细胞具有氧需求小，对剪切敏感等特点，因此通常不采用微生物培养时的高剪切的搅拌，此时细胞混合的均匀程度就显得特别重要。;主要植物大规模培养的生物反应器;气升式生物反应器分为内循环式和外循环式两类，优点：结构简单，操作费用也很低；没有泄露点和死角，运动部件不易污染；流动性比鼓泡塔更为均匀，可以在低剪切力下达到较好的混合和较好的氧传递效果，是培养植物细胞最合适的反应器之一。缺点：高密度培养时混合不够均匀。 转鼓式生物反应器通过转动促进反应器内的氧及营养物的混合，设置挡板有助于提高氧传递，在高密度培养时有高的传氧力，优于搅拌式。缺点：难于大规模操作，放大困难。;固定化细胞生物反应器 植物细胞遗传的生理特性的不稳定性、细胞大小的不一致性、高产细胞系的低产率等是植物细胞培养中的突出难题，固定化细胞培养在一定程度上可以克服上述弊端。 植物细胞固定化培养的优点：①可保护细胞免受剪切；②细胞可长时间重复使用；③易于实现细胞的高密度培养；④细胞间接触良好，易于分化，有利于次级代谢产物的合成；⑤减少细胞的遗传不稳定性；⑥易于实现连续化操作。 分类：凝胶包埋、膜固定化、共价交联、吸附、表面固定化和多孔载体固定化等。 借助表面活性剂或其他方法改变细胞通透性，使代谢产物分泌到培养基中，可提高产物产率。;各种生物反应器性能比较