桑寄生不同部位总RNA提取方法比较研究.PDF

世界科学技术—中医药现代化★思路与方法 桑寄生不同部位总RNA提取方法比较研究＊ 1,2 1 ＊＊ 2 3 2 韦树根 ，马小军 ，付金娥 ，周 敏 ，潘丽梅 (1.中国医学科学院 北京协和医学院  药用植物研究所  北京  100193；  2.中国医学科学院药用植物研究广西分所  南宁  530023；3.广西中医药大学药学院  南宁  530222) 摘 要 : 目的：从桑寄生中提取高质量的RNA 。方法：以桑寄生叶片、茎、花和种子为材料，采用TRIzol 试剂盒法、改良TRIzol 法、CTAB-LiCl 法、CTAB- 异丙醇法4 种方法，比较不同材料及不同方法分离RNA 的效果。结果：TRIzol 试剂盒法和改良TRIzol 法均不能有效的去除桑寄生中的多糖和蛋白质等杂质，不适 合用于桑寄生RNA 的提取；CTAB-LiCl 法提取的RNA 质量较高、完整性较好, 可满足各种后续分子生物 学实验的要求；CTAB- 异丙醇法提取桑寄生RNA 的效果虽然较好，但还达不到小RNA 分析实验要求。结论： 为桑寄生后续分子生物学研究提供基础，也为次生代谢物较丰富的药用植物RNA 的提取提供参考。 关键词 ：桑寄生 RNA 提取 多糖 蛋白质 CTAB-LiCl doi ：10.11842/wst.2016.03.003　　中图分类号：R282　　文献标识码：A 2015 版《中国药典》规定桑寄生为桑寄生科植 但在桑寄生不同部位的RNA 提取方面未见有研究。 物桑寄生 Taxillus chinensis DC. ）Danser 的干燥 故本文通过比较TRIzol 法、改良TRIzol 法、CTAB- （ [1] 带叶茎枝 。桑寄生苦、甘、平，具有祛风湿，补肝肾， LiCl 法和CTAB- 异丙醇四种方法提取桑寄生不同 强筋骨，安胎元；多用于治疗风湿痹痛，腰膝酸软， 部位的RNA, 所得结果将为桑寄生进一步的分子生 筋骨无力，崩漏经多，妊娠漏血，胎动不安，头晕目 物学研究奠定基础。 眩。提取质量高、纯度高、完整性好的RNA 是分子 1 材料与方法 生物学研究的重要基础，对于进行RT-PCR ，cDNA . … 实验材料 合成、RNA 序列分析、Northem 印迹杂交等具有重 1 1 [2,3] 2015 年6-7 月样品采于广西药用植物园栽培 要意义 。由于植物组织中化学成分复杂， [4] 基地, 样品包括桑寄生叶片、茎、花、果立即用液氮 并没有一种RNA 提取方法适用于所有的植物 。 桑寄生化学成分复杂，目前从桑寄生提取物中分离 速冻或-80 ℃冰箱保存备用。 . … 实验试剂 到多种化学成分，主要有甾体化合物、三萜、黄酮类 1 2 化合物、有机酸、胺类化合物、生物碱、氨基酸和肽 TRIzol 试剂盒（天津市福晨化学试剂厂，批 [5] 号：84704 ），氯仿（天津市福晨化学试剂厂，批号： 类化合物等 ，复杂的化学成分增加了桑寄生RNA 提取的难度，虽然李永华等对桑寄生化学成分、种 ），异丙醇（天津市致远化学试剂有限公 [6-8] 司，批号），氯仿 异戊醇为24 1 （天津博׃ ׃ 子特性及DNA 条形码鉴定等方面进行了研究 ， 迪化工股份有限公司，批号），苯酚（北京