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实验一 蛋白质的性质实验 蛋白质及氨基酸的呈色反应 蛋白质的沉淀反应 坚持 1. 学习几种常用的鉴定蛋白质和氨基酸的方法及其原理。 2. 加深对蛋白质胶体分子稳定因素的认识，了解蛋白质的沉淀反应、变性作用的原理及其相互关系。 【目的和要求】 坚持 （一） 蛋白质及氨基酸的呈色反应 双缩脲在碱性条件下可与Cu2+结合生成复杂的紫红色化合物。此反应称为双缩脲反应。 蛋白质或二肽以上的多肽分子中，含有多个与双缩脲结构相似的肽键，因此也有双缩脲反应，可用此法鉴定蛋白质的定性和定量。 1. 双缩脲反应 【实验原理】 坚持 水合茚三酮 还原茚三酮 紫色物质 注意： 脯氨酸、羟脯氨酸与茚三酮反应生成黄色物质。 此反应用于定性、定量鉴定氨基酸。 2. 茚三酮反应 坚持 (二) 蛋白质的沉淀反应 蛋白质分子由于形成水化层和双电层而成为稳定的胶体颗粒。 在一定的物理化学因素影响下，蛋白质颗粒失去电荷、脱水，甚至变性而丧失稳定因素，即以固态形式从溶液中析出，这种作用称为蛋白质的沉淀反应。 蛋白质 H2O H2O H2O H2O + + + + (pH pI ) 坚持 1. 可逆沉淀反应 在发生沉淀反应时，蛋白质虽已沉淀析出，但其分子内部结构并未发生显著变化，基本上保持原有的性质。沉淀因素除去后，蛋白质沉淀可再溶于原来的溶剂中。这种沉淀反应称为可逆沉淀反应。 　 盐析作用 脱去水化层 电荷被中和 低温下乙醇或丙酮对蛋白质的短时间作用 等电点沉淀 用大量中性盐使蛋白质从溶液中析出的过程。 坚持 在发生沉淀反应时，蛋白质的分子内部结构，空间构象遭到破坏，失去其天然蛋白质的性质，这时蛋白质已发生变性。变性后的蛋白质沉淀不能再溶解于原来的溶液中，这种沉淀反应称为不可逆沉淀反应。 2. 不可逆的沉淀反应 重金属盐 有机溶剂 生物碱试剂 过酸、过碱 加热、震荡、超生波 坚持 【实验方法】 双缩脲反应: 取少量尿素结晶，加入干燥试管中。用微火加热使尿素熔化。熔化的尿素开始硬化时，停止加热，尿素放出氨，形成双缩脲。冷后加入10滴双缩脲试剂，混匀, 观察颜色变化。 另取1支试管，加入卵清蛋白溶液 1ml 再加入5滴双缩脲试剂，混匀，观察颜色变化。 坚持 2. 茚三酮反应 取 2 支试管，分别加入卵清蛋白溶液和0.5%甘氨酸溶液4滴 ，再加入2滴0.1% 茚三酮乙醇溶液，混匀，在沸水浴中加热 1-2 分钟，放置冷却，观察颜色变化，并比较蛋白质和氨基酸呈色深浅。 坚持 3. 蛋白质的盐析作用 取 1 支试管，加入 3ml 蛋白质- NaCl 溶液和 3ml 饱和硫酸铵溶液，混匀，静置 10 分钟，球蛋白则沉淀析出。过滤后向滤液中加入硫酸铵粉末，边加边用玻璃棒搅拌，至粉末不再溶解，析出的沉淀为清蛋白。静置，弃上部清液，取部分清蛋白沉淀加水稀释，观察它是否溶解。 坚持 4. 重金属沉淀蛋白质 取 1支试管，加入约 1ml 卵清蛋白质液，加入2% 硝酸银溶液1 滴，观察沉淀的生成。 5. 有机酸沉淀蛋白质 取 1 支试管，加入卵清蛋白质液约 0.5ml，然后滴加10% 三氯乙酸溶液数滴，观察沉淀的生成。 坚持