第二章.组织走培养的原理.pptVIP

第二章.植物组织培养的基础 本章内容 第一节 细胞全能性和细胞分化 第二节 离体条件下植物器官的发生 第三节 影响植物离体形态发生的因素 第一节.细胞全能性和细胞分化 植物细胞的全能性（totipotent)：植物细胞具有该植物体全部遗传的可能性，在一定条件下具有发育成完整植物体的潜在能力。 原理：生物体的每一个细胞都包含有该物种所特有的全套遗传物质，都有发育成为完整个体所必需的全部基因，从理论上讲，生物体的每一个活细胞都应该具有全能性。 潜在全能性的原因：基因表达的选择性 科学研究表明，处于离体状态的植物活细胞，在一定的营养物质、激素和其他外界条件的作用下，就可能表现出全能性，发育成完整的植株。人工条件下实现的这一过程，就是植物组织培养。 1.遗传性的差异 不同植物种间，由于其遗传性的不同，起源也不尽相同，细胞培养条件有较大差异。 不同品种，培养条件差异很大 2.生理状态的差异 同一植株的不同部位细胞，培养条件差异很大 细胞的再生能力与其分化程度呈负相关，就是说细胞分化程度越高其再生能力越低 差异：（1） 受精卵的全能性最高 （2） 受精卵分化后的细胞中，体细胞的全能性比生殖细胞的低。 3.位置效应 位置效应：同一植株的同一类型外植体进行培养，而且管理条件完全相同，但是这些外植体的分化情况也有较大差异 。 原因：内源激素分布梯度 第二节 离体条件下植物器官的发生 组织培养过程 外植体脱分化是实现植物细胞全能性的第一个步骤，其结果直接影响离体培养的成功与否。只有掌握好如何调控外植体的脱分化，才能使组织培养向预期的方向发展。 一、脱分化和再分化 （一）脱分化 1.概念 分化（differentiation）:随着植物的生长，细胞在形态结构和功能上发生永久性(不可逆转性)适度变化的过程就叫做分化。 分化的结果导致细胞分裂能力的丧失，伴随的是细胞的分化、成熟与组织的形成，是植物根、茎、叶、花、果实和种子的形成，是一个成熟植物体的出现。在正常的自然状态下，这些已经分化的细胞不会再恢复分裂能力重新开始细胞分裂，直到植物体死亡为止。 当把一个已经失去了分裂能力，处于分化成熟和分裂静止状态的细胞置于特定的增殖培养基上时，它首先发生的变化是回复到分生性状态，这一状态包括由溶酶体的活动而将失去功能的细胞质组分降解，并产生新的细胞质组分(即细胞器的破坏与重建)，同时细胞内酶的种类与活性发生改变，蛋白质合成和细胞代谢过程也发生改变，最后引起基因表达的改变，细胞的性质和状态发生了扭转，可以说是返老还童。由失去分裂能力的细胞回复到分生性状态并进行分裂，形成无分化的细胞团即愈伤组织的现象(或者说是过程)称为脱分化。 脱分化（dedifferentiation)：当外植体已分化的细胞，在切割损伤和培养物内外因素的作用下，逐渐丧失其原有分化的结构和功能，合成代谢变得旺盛，细胞壁由厚变薄，其内部结构也发生变化，细胞高度液泡化，形成无组织的细胞团或愈伤组织。 外植体脱分化是实现植物细胞全能性的第一个步骤，其结果直接影响离体培养的成功与否。只有掌握好如何调控外植体的脱分化，才能使组织培养向预期的方向发展。 分化： 2、脱分化过程中细胞生物学变化 气体交换率增加 RNA随体的合成 过氧化物酶增加 蛋白质活跃合成 酚类物质增加 乙烯合成 3、与脱分化有关的因子及其作用 （1）损伤刺激。 损伤形成的特殊刺激是引起脱分化的第一个因子。损伤首先导致外植体产生生化响应，损伤导致气体交换率变化和呼吸活性变化，还导致很多酶活性增加，一些代谢物的含量也变化。 （2）培养细胞的异质性 用茎等典型的各种已分化的细胞类型的复合体作为外植体，细胞之间存在很大的异质性，异质细胞对培养条件的刺激有不同的敏感性，因此可能只有某种类型和某一部分的细胞可以脱分化以至分裂，其他细胞则不能。异质性的方面主要是指不同的倍数体和不同的生理状态。 （3）生长调节剂的影响 创伤可以引起少数细胞的分裂，但是切面上易于形成多酚物质沉淀形成的保护层，从而使得表面细胞停止分裂，加入2，4－D等激素后，导致外植体细胞生物学和细胞分裂的更强烈的变化，结果进入第一次分裂的细胞百分率更高。 （4）培养环境的影响 光线对外植体最初的分裂有明显影响，外植体在DNA复制开始后，对光线不敏感，在后续培养期间，光线对生长也很少有刺激作用。 （二）、再分化 再分化（redifferentiation):经脱分化的组织或细胞在一定的培养条件下可有转变为各种不同功能细胞的能力。 再分化是指离体培养物由脱分化状态再度分化，再分化可以在细胞水平、组织水平和器官水平递进的进行，最后再生完整植株。培养物的再分化，通过胚胎发生和直接分化器官再形成植株这两个途径实现。