单克隆抗体依那西普融合蛋白的活性结构保护.PDF

Vol.37 高等 学校 化 学 学报 No.2 2016年2月 摇 摇 摇 摇 摇 摇 CHEMICALJOURNAL OF CHINESE UNIVERSITIES摇 摇 摇 摇 摇 摇 274 ~280 doi:10.7503/ cjc 摇 摇 单单克隆抗体依那西普融合蛋白的 活性结构保护 1 1 2 2 2 潘摇 琦 ,李代禧 ,郭柏松 ,杨春生 ,杨摇 智 (1. 上海理工大学食品科学与工程研究所,上海200093; 2.上海东富龙科技股份有限公司冻干工艺研究室,上海201108) 摘要摇 采用拉伸模拟和伞状采样的方法,利用Gromacs软件和Amber99sb鄄ildn分子力场研究了不同浓度的海 藻糖体系和海藻糖鄄甘露醇复合体系中单克隆依那西普融合蛋白二聚体的解离过程. 结果表明,海藻糖能显 著增强依那西普二聚体活性结构的稳定性,且海藻糖鄄甘露醇的复合保护优于海藻糖的单一保护;保护剂的 种类及其选择性吸附保护的特定位置对依那西普蛋白二聚体活性结构保护效果的影响显著. 关键词摇 依那西普;拉伸模拟;伞状采样;海藻糖 中图分类号摇 O629;Q341摇 摇 摇 摇 文献标志码摇 A摇 摇 摇 摇 [1] 依那西普(Etanercept)是1998年由美国食品药品监管局(FDA)批准用于类风湿性关节炎 、银屑 [2] [3] [4] 病性关节炎 、强直性脊柱炎 和幼年慢性关节炎 等疾病的抗体药物. 该药物是以中国仓鼠细胞表 达系统产生的人肿瘤坏死因子(TNF鄄琢)受体P75与IgG Fc段结合的二聚体融合蛋白,由931个氨基酸 5[5] 组成,相对分子质量为1郾5伊10 . 其作用机制是通过与TNF鄄琢竞争性结合,抑制其生物活性,从而阻 [6] 断TNF鄄琢介导的细胞反应 . 市售的依那西普一般为无菌、 白色、不含防腐剂的冻干粉末,其储存温度为2~8 益,溶解后应立 即使用;如果未立即使用,应将溶解后的依那西普注射液贮存于2 ~8 益,最长可保存6 h. 依那西普 抗体蛋白复溶后的稳定性差,容易分解成单体. 在恶劣条件下,为稳定抗体药物分子的活性结构,通常会加入一些糖类保护剂,如海藻糖(THL)、 [7] 蔗糖(SUC)、甘露醇(MAN)和山梨醇(SOR)等作为辅料 ,但保护机理尚不清楚. 为此,本文以依那 西普为研究对象,以海藻糖和甘露醇为保护剂,研究了低温下保护剂对单克隆抗体融合蛋白活性结构 的保护作用与规律,分析了不同保护剂的保护效果和作用机理,以期为抗体蛋白辅料配方的筛选和优 化提供技术支持. 1摇 实验部分 1.1摇 结构准备 采用上海理工大学计算生物学实验室的五舟高性能服务器集群作为高性能并行计算的计算平台. 集群共有24个计算节点,每个计算节点有2颗Intel XeonE5鄄2650处理器(2郾0 GHz,每颗8核心). 选择依那西普晶体结构(PDB ID:2DTQ)溶剂化后的模型作为保护体系的初始模型. 其晶体结构由 X射线衍射分析得到,分辨率为0郾2 nm,获取地址为http:/ / / pdb/ files/ 2dtq.pdb. 结构 [图1(A)]尾部2个单体由3个二硫键相连,通常二硫键易发生可逆氧化还原反应,属于氧化还原保 护. 因此,在建模处理时剔除了二硫键相连的部分. 保护剂海藻糖[图1(B)]和甘露醇[图1(C)]的晶