IEX鄄1相互作用蛋白的筛选与鉴定-生物化学与生物物理进展.PDFVIP

生物化学与生物物理进展 Progress in Biochemistry and Biop hys ics 2014, 4 1(5): 508~514 IEX 1 相互作用蛋白的筛选与鉴定* 1) 1) 2) 1) 1) 1) 1) 1)** 刘立宏 李 辉 李 洁 欧阳玉蓉 郭鸿彬 崔云鹤 刘颖颀 肖 涛 1) 2) ( 中南大学湘雅二医院骨科、创伤骨科研究室，长沙4 100 11； 株洲一医院肾病内科，株洲4 12000) 摘要 骨肉瘤即原发于骨的恶性肿瘤，易发生早期肺转移且预后差，恶性程度高 本研究小组前期研究发现，IEX-1 在骨肉 瘤 具有重要作用 为了阐明其作用机制，本研究运用酵母双杂交技术筛选其相互作用蛋白，共鉴定出12 个IEX-1 相互作 用蛋白，包括生物氧化相关酶 、分子伴侣、信号转导相关蛋白等 并首次证实clusterin(CLU，又名载脂蛋白J)与IEX-1 存 在相互作用，两者在细胞 具有很好的共定位 采用RNAi 干扰减低骨肉瘤细胞中内源性CLU 表达水平，显著抑制了细胞 增殖与细胞侵袭能力 为阐明IEX-1 在骨肉瘤发生发展中的作用机制提供了重要的线索，为骨肉瘤的早期诊治及预后监测提 供了新的靶点 关键词 IEX-1，骨肉瘤，clusterin ，蛋白质相互作用，酵母双杂交 学科分类号 Q71 DOI: 10.3724/SP.J.1206.2013.00020 骨肉瘤恶性程度高，侵袭力强，易发生早期肺 致IEX-1 基因的表达下调，证实了IEX-1 基因在骨 [6] 转移，预后差，严重影响青少年身心健 目前治 肉瘤 的重要功能及作用机制 以上研究充分合 疗手段以手术为主，全身性化疗为辅的综合治疗， 理解释为在骨肉瘤细胞 IEX-1 表达上调是 于 [1] 病人5 年存活率有一定程度增加 但这种用于化 p53 突变后解除转录抑制作用，另外也显示出 疗的细胞毒性药物副作用大，加之肿瘤细胞具有内 IEX-1 作为治疗靶点的前景 然而，目前关于骨肉 在性和获得性抗肿瘤药物的多药耐药(MDR)特性， 瘤 IEX-1 对下游靶基因及其相关信号通路的调节 [2] 常导致化疗效果不佳 ，终其原因是对骨肉瘤的发 并不十分清楚，寻找相互作用蛋白对阐明信号通路 病机制缺乏深入了解，缺乏骨肉瘤靶向治疗药物 是非常有效的研究策略和切入点 本研究中，我们 本小组前期研究发现，早期应激基因IEX-1 在 应用酵母双杂交筛选鉴定出IEX-1 相互作用蛋白， 骨肉瘤 表达水平比癌旁组织和软骨瘤组织高， 进一步采用免疫共沉淀、免疫荧光共定位验证其相 siRNA “沉默”IEX-1 基因后，MG-63 细胞凋亡率 互作用蛋白，并初步探讨证实的互作蛋白在骨肉瘤 增高，并且出现了细胞周期G1 期阻滞，电镜观察 中的功能 [3] 细胞出现了凋亡特征性变化 进一步实验发现， 1 材料与方法 IEX-1 在 1.0 mol/L 的As O 作用MG-63 细胞后， 2 3 [4] 材料 表