分光光度法定量5.doc

顶空气相色谱系列讲座（18） 人体血液中一氧化碳的分析——分光光度法定量5 三、分光光度法1、紫外光谱法原理CO中毒血中可能含有三种血红蛋白： ⑴碳氧血红蛋白（HbCO）——与CO结合的Hb； ⑵ 氧合血红蛋白——与O2结合的Hb ⑶血红蛋白——没结合的Hb。 它们在500nm~600nm范围内吸收光谱见图-2。碳氧血红蛋白最大吸收峰分别在568.2nm和538nm；氧合血红蛋白最大吸收峰分别在576.2nm和542nm；血红蛋白最大吸收峰在555nm。如血液含三种形式的血红蛋白（其中的微量高铁血红蛋白可忽略不计），则其光谱呈现三种光谱的混合形。如在血液中加入还原剂（连二亚硫酸钠或硫化铵）溶液，则可将氧合血红蛋白及高铁血红蛋白还原为血红蛋白，而碳氧血红蛋白不被还原，因而血液中只存在碳氧血红蛋白和血红蛋白两种不同的形式，它们的吸收光谱见图-1用分光光度法测定血中HbCO定性和定量是基于HbCO和对光谱的特征吸收不同，和特征吸收与浓度有量的关系。HbO2在589nm~577nm和556nm~536nm区间有两条吸收谱带，其最大吸收是579nm和542nm。HbCO在579nm~564nm和548nm~530nm区间有两条吸收谱带，其中最大吸收是572nm和539nm。加入还原剂后检血中HbO2和高铁血红蛋白被还原为血红蛋白（Hb），此时吸收谱带变为一