课件：纤维素酶类糖苷水解酶及其降解机理.pptVIP

* 厌氧细菌纤维素酶的结构与功能 4.4.5纤维小体的多样性 * 4.4.6 纤维小体基因在基因中的分布规律 厌氧细菌纤维素酶的结构与功能 * 4.4.7 微型人造小体的研究进展 纤维小体实际上是一个微型而高效的纤维素降解机器。现在已提出了通过理性人工设计并通过工程手段提高天然纤维小体降解活力的新思路 。 可行性依据： 1）对于细菌的粘连模块和对接模块，无论是单独生成还是移植到异源性的蛋白质上，它们都能忠实地保持自身的生物学性质。 2）二者高亲和力相互作用在一些产纤维小体的细菌种类之间具有物种专一性。 厌氧细菌纤维素酶的结构与功能 * 与天然纤维小体相比，有三个主要的不同之处： 1）含有酶的数量有限。 2）是同源性的。 3）每个酶在微型手脚架蛋白上的位置是受到控制的。 未来前景包括构建新的杂交手脚架蛋白，使之能够将三个或多个不同的酶结合到特定位点上。嵌合体的稳定性也是影响它将来工业化应用的一个因素。 厌氧细菌纤维素酶的结构与功能 4.4.7 微型人造小体的研究进展 * 4.5好氧真菌纤维素酶的结构与功能 好氧真菌分泌的纤维素酶分子一般都由一个糖基化的连接肽将一个较大的催化结构域和较小的纤维素结合结构域连接起来构成。 * 4.5.1 催化结构域及催化断键机理 纤维素酶催化断键功能相似，但属不同糖苷水解酶家族。 T.reesei是纤维素酶体系研究最为深入的好氧真菌。其中CBH I是该菌所产主要的外切酶。 催化中葡聚糖异头碳的构型并不发生变化。 水解主要产物是纤维二糖。 好氧真菌纤维素酶的结构与功能 * 好氧真菌纤维素酶的结构与功能 4.5.1 催化结构域及催化断键机理 * 图4.9 好氧真菌纤维素酶的结构与功能 * 有待研究的问题： 1.结晶纤维素表面如何游离出单根葡聚糖分子链。 2.单根葡聚糖链如何快速准确地进入CBH的催化孔道中。 3.葡聚糖链如何在催化孔道中高效地持续性单方向运动。 4.5.1 催化结构域及催化断键机理 好氧真菌纤维素酶的结构与功能 * 4.5.2 纤维素结合结构与的结构与功能 好氧真菌纤维素酶的结构与功能 当多个不同蛋白质中都存在一个相同或相似的结构域时，该结构域称之为模块。每一纤维素酶分子包含催化模块和碳水化合物模块（CBM）。 基于结构和功能，将不同CBM分成三类： * 好氧真菌纤维素酶的结构与功能 4.5.2 纤维素结合结构与的结构与功能 * CBM的功能 推测其功能是将催化结构域拉近到不溶性的纤维表面，使纤维素水解过程易于进行。但是其功能及催化中的分子机理仍未形成共识。 好氧真菌纤维素酶的结构与功能 4.5.2 纤维素结合结构与的结构与功能 * 4.5.3 链接区的结构与功能 好氧真菌纤维素酶的结构与功能 纤维素酶的模块结构通常由韧性的糖基化连接区连接在一起。 其有效长度及柔韧性也是酶催化过程的关键。 富含脯氨酸、苏氨酸和甘氨酸。 * 4.5.3 链接区的结构与功能 好氧真菌纤维素酶的结构与功能 虽然许多结构域三级结构已得到解析，但目前还没有一个包含完整纤维素酶的三维结构获得解析。 * 4.6 纤维素酶持续性降解结晶纤维素 的动态催化过程 结晶纤维素的降解是纤维素降解的关键限速步骤。持续性作用的外切纤维素酶是降解结晶纤维素的主要酶类。 可分为两个过程： 纤维素结晶超分子结构的破坏。（需外加能量） 糖苷键的断裂。（为酶催化反应，是动力学过程） * 4.6.1 纤维素酶分子-底物之间的结合过程 纤维素酶通过结合结构域吸附到底物上； 定位于底物表面上特定的化学键上； 形成酶-底物复合物； β-糖苷键的水解，同时酶分子沿着纤维素链前进； 纤维素酶从底物脱吸附，或重复第4步，当催化结构域离开纤维素链时重复第2、3步； β-葡萄糖苷酶水解纤维二糖形成葡萄糖。 反应过程存在产物的抑制，及底物结构变化对酶分子催化过程的影响等因素。 纤维素酶持续性降解结晶纤维素的动态催化过程 * 4.6.2 外切纤维素酶对底物分子的催化断键过程 酶分子-底物复合物 待酶分子与底物结合构象变化形成稳定复合物后，催化断键是瞬间发生。一般通过分子动力学/量子力学(MM/QM)，的方法进行研究。 对外切纤维素酶CBH I 的分子动力学模拟，CBH I 的催化孔道与糖链之间有分子间氢键作用，糖分子所有的羟基与各种氨基酸残基相互作用，起到稳定酶-底物复合物的作用。 纤维素酶持续性降解结晶纤维素的动态催化过程 * 共价糖基-酶中间体的形成 催化循环的第一步 纤维素酶持续性降解结晶纤维素的动态催化过程 4.6.2 外切纤维素酶对底物分子的催化断键过程