GB/T 36779-2018芹菜枯萎病菌检疫鉴定方法.pdf

ICS 65.020.01 B 16 国 中华人民共和国国家标准 GB/T 36779-2018 芹菜枯萎病菌检疫鉴定方法 Detection and identification of Fusarium oxysporum f. sp.αpii 2018-09-17 发布 2019-04-01 实施 国家市场监督管理总局峪非 中国国家标准化管理委员会 0(.. " I (J GB/ T 36779-20 18 目u 昌 本标准按照GB/T 1.1-2009 给出的规则起草。 本标准由全同植物检疫标准化技术委员会（SAC/TC 271）提出井归口。 本标准起草单位：中华人民共和同珠海出入境检验检疫局、浙江大学、中华人民共和同烟台归入境 检驹检疫局。 本标准主要起草人：张卫东、黄永辉、权永兵、宋凤鸣、迟远丽、徐森锋、廖力、林伟、李金庆、于金迪。 I GB/ T 36779-20 18 附录 D （规范性附录） 尖抱镰刀菌（ Fusariwn oxy sporum ) PCR 检测方法 D.1 引物信息 PCR 检测引物根据尖子包镰刀菌萨微管蛋向基因（日－tubul in, TUB）序列设计，序列见表D. 1 。 表 D. 1 PCR 引物 扩增片段大小／ bp 目标基因 可｜物序列 一一--r Fl 5'-AGGAGGCCATCGATGTTGTG-3' 白－微管蛋h 650 基因（TUB) RZ 51 GTCCATCT CJ\T CT CJ\TGCATC 3’ D.2 PCR 反应体系 PCR 扩增反应体系为 25 µL，每个反应分别加入 10 × PCR 缓冲液 2. 5 µL, dNTP(lO mmo l/L) 1 µL，上下游引物各 1 ,uL (lO µmol/L),T叫 DNA 聚合附（5 U / vL)0 .5 J.LL, DNA 模版 1 µL，最后补充 双蒸水至总体积为25 µLo 用尖子包镰刀菌 DNA作阳性对照，以非尖础镰刀菌作为阴性对照，同时设置 空向提取对照和空内对照，每个样品重复3 次。 D. 3 PCR 反应条件 PCR 反应条件为：95 ℃预变性 5 min; 30 个循环为 95 ℃变性 30 s、 60 ℃退火 45 s、 72 ℃延伸 1 min； 最后 72 ℃延伸 5 min,PCR 结束后产物于4 ℃冰箱保存。 D.4 电泳分析 取5 vL 扩增产物与 1 µL 的 6 ×上样缓冲破1昆合均匀，在 0. 5 ×TBE 缓冲液配制