GB/T 36815-2018蓝莓果腐病菌检疫鉴定方法.pdf

ICS 65.020.01 B 16 国 中华人民共和国国家标准 GB/T 36815-2018 蓝莓果腐病菌检疫鉴定方法 Detection and identification of Diaporthe vαccinii Shear 2018-09-17 发布 2019-04-01 实施 国家市场监督管理总局峪非 中国国家标准化管理委员会 0(.. I (J GB/T 36815-20 18 目u 昌 本标准按照GB/T 1.1-2009 给出的规则起草。 本标准由全同植物检疫标准化技术委员会（SAC/TC 271）提出井归口。 本标准起草单位：中华人民共和同天津归入境检验检疫局。 本标准主要起草人： 罗加凤、崔铁军、刘跃庭、张莹、黄同明、廖芳。 I GB/T 36815-2018 附录 C （ 资料性附录） 致病性测定症状表现 致病性视rJ 定症状表现如罔 C. l 所示。 注： 习I Fl M .E . Daykin 等，1990。 图 C. 1 致病性现~定症状一一4 周后枝条上出现深揭色溃痛病斑 9 GB/T 36815-2018 附录 D （资料性附录） 培养基配制方法 D.1 酸性马铃薯葡萄糖培养基（APDA) 马铃薯去皮后洗净，切成小块，称取 200 L蒸馆水中煮 30 min，用 4 层纱布过滤，加入 20 g 葡萄糖、 18 g 琼脂，加热使之完全榕解，蒸馆水定容至 1 000 mL，用乳酸将 pH 调至 5. 0 ～6. 0 ，分装于三角瓶中， 121 ℃高压灭菌20 min。 D.2 APDA 选择性培养基 高压灭菌后的 APDA 冷却至45 ℃～50 ℃时，无菌操作下 1 000 mL 培养基中分别加入0. 3 g 链霉 素和0. 3 g 青霉素，泪匀，倒平板，静置备用。 10 GB/T 36815-2018 附录 E （ 资料性附录） DNA 提取方法 DNA 提取步骤如下： a) 挑取菌丝约0.1 g ，用灭菌洁、纸吸干水分，放入 1.5 mL 离心管中，力u液氮冷冻，用塑料科磨碎菌 丝，待用。 b) 离心管中加入 400 µL~ 500 µL CTAB 缓冲液和0. 1 g 蛋白酶K，混匀，65℃水浴l h, 14 000 g 离心 5 m