试验一细胞凝集反应.docVIP

PAGE PAGE 1 实验一 细胞凝集反应 实 验 目 的 通过对红细胞凝集现象的观察，加深理解细胞外被的结构及其功能。 实 验 原 理 细胞膜是双层脂镶嵌蛋白质结构，脂和蛋白质又能与糖分子结合为细胞表面的分枝状糖外被。目前认为：细胞间的联系，细胞的生长和分化，免疫反应和肿瘤发生都和肿瘤发生都和细胞表面的分枝状糖分子有关。 凝集素（lectin）是一类含糖的（少数例外）并能与糖专一结合的蛋白质，它具有凝集细胞和刺激细胞分裂的作用。凝集素使细胞凝集是由于它与细胞表面的糖分子连接，在细胞间形成“桥”的结果，加入与凝集素互补的糖可以抑制细胞的凝集。 实 验 用 品 1. 土豆块茎。 2. 显微镜、粗天平、载玻片、滴管2支、离心管2支。 3. PBS缓冲液 称取NaCl 7.2g、Na2HPO4 1.48g、KH2PO4 0.43g、加蒸馏水，定容至1000ml，调pH值到7.2 4. Alsever溶液： 葡萄糖 2.05 柠檬酸钠 0.89 柠檬酸 0.05 氯化钠 0.42 蒸馏水 100ml 调节pH到7.2，高压灭菌10min，置4℃ 5. 1%的红细胞悬液的制备 从集市杀鸡处取血，按1ml血加4ml Alsever溶液的比例迅速混匀，置于4℃冰箱保存备用（一周内使用）。使用前加入0.85%生理盐水离心（2000r/min，5min）洗涤二次，最后按红细胞压积体积用生理盐水配成1 实 验 方 法 1. 称取土豆去皮块茎2g,加10ml PBS缓冲液，浸泡2h，浸出的粗提液中含有可溶性土豆凝集素。 2. 用滴管吸取土豆凝集素和2%红细胞液各一滴，置载玻片上，充分混匀，静置20min后于低倍显微镜下观察血球凝集现象。 以PBS液加2%红细胞液作对照实验。 实 验 作 业 1.绘制鸡红细胞凝集图 2.用简图表示凝集素使红细胞凝集的原理 实验二 巨噬细胞吞噬现象观察 实 验 目 的 通过对小白鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞活动的观察，加深理解细胞吞噬作用的过程及其意义。 掌握小鼠腹腔注射给药和脊椎脱臼处死方法。 实 验 原 理 在高等动物体内，有大小两类吞噬细胞，即巨噬细胞和嗜中性粒细胞，专司吞噬作用，成为非特异免疫功能的重要组成部分。 巨噬细胞由骨髓干细胞分化生成，然后进入血液到达各种组织内，并进一步分化为各种巨噬细胞。当病原微生物或其它异物侵入机体时，能招引巨噬细胞，而巨噬细胞有又趋化性，能响应招引因子的招引，产生活跃的变形运动，主动向病原物和异物移行，在接触到病原物和异物时，即伸出伪足，将之包围并内吞入胞质，形成吞噬泡，既而细胞质中的初级溶酶体与吞噬泡发生融合，形成吞噬溶酶体，通过其中水解酶作用下，将病原物杀死，消化分解，最后将不能消化的残渣排出细胞外。 实 验 用 品 显微镜、解剖盘、离心管，剪刀、镊子、载玻片、盖玻片、注射器、吸管、吸水纸，离心机。 试剂： 0.85%生理盐水：0.85g氯化钠溶于100ml Alsever溶液： 葡萄糖 2.05 柠檬酸钠 0.89 柠檬酸 0.05 氯化钠 0.42 蒸馏水 100ml 调节pH到7.2，高压灭菌10min，置4℃ 0.4%台盘蓝染液 台盘蓝染粉 0.4 0.85%生理盐水 100ml 6%淀粉肉汤（含台盘蓝染液） 牛肉膏 0.3 蛋白胨 1.0 氯化钠 0.5 蒸馏水 100ml 加热溶解后，加入可溶性淀粉6.0g，促使溶解，再煮沸灭菌，置于4 材料 小白鼠 1%鸡红细胞悬液 从集市杀鸡处取血，按1ml血加4ml Alsever溶液的比例迅速混匀，置于4℃冰箱保存备用（一周内使用）。使用前加入0.85%生理盐水离心（2000r/min，5min）洗涤二次，再按红细胞压积体积 实 验 方 法 实验前一天，给小白鼠腹腔注射6%淀粉肉汤（含台盘蓝染液）1ml。注射时，先用右手抓住鼠尾提起，放在实验台上，用左手的拇指和食指抓住小鼠的两耳和头颈皮肤，将鼠体置于左手心中，把后肢拉直，用左手的无名指和小指按住尾巴和后肢，用中指固定前肢，即可在腹部后1/2处的一侧注射。进针不要过深，否则易损害肝及血管等，造成出血致死。 实验时，每组取一只注射过淀粉肉汤的小白鼠，腹腔注射1%鸡红细胞悬液1ml，轻柔小鼠腹部，使悬液分散。 20min后，用脊脱臼法处死小鼠（右手抓住小鼠尾巴，左手拇指和食指同时向下按住鼠头，右手用力向后拉，使脊髓与脑髓间断