ABO血型正、反定型.docVIP

PAGE PAGE 6 ABO血型正、反定型操作规程 [目的] 保证ABO血型鉴定准确，确保临床输血安全。 [适用范围] XXX医院输血科 [职责] 具有专业技术的工作人员主要负责本院输血（或备血）标本的ABO血型鉴定（但只对该单份标本负责）。 [相关文件] 试剂采购、保存和使用管理程序 设备采购、使用管理程序 消毒与清洁管理程序 标本采集、运输、保存和报废管理程序 紧急用血管理程序 [相关记录] 仪器设备的采购、使用和维护记录 仪器的温度记录 恒温水温箱的换水和消毒记录 消毒液的配置记录 清洁消毒记录 试剂采购、使用记录 标本交接和报废记录 紧急用血记录 [实验原理] 　　ABO血型是根据红细胞表面存在的凝集原决定的。存在A凝集原的称为A型，存在B凝集原的称为B型。而血清中还存在凝集素。当A凝集原与抗A凝集素相遇或B凝集原与抗B凝集素相遇时，会发生红细胞凝集反应。一般A型血清中含有抗B凝集素，B型血清中含有抗A凝集素，因此可以用标准血清中的凝集素与被测者的红细胞反应（称为正定型），用标准红细胞与被测者血清中的凝集素反应（称为反定型），以确定其ABO血型。 [仪器器械] 　　玻璃试管、玻片、记号笔、一次性塑料滴管、显微镜、普通离心机、试管架、恒温水温箱、试剂保存冰箱、标本保存冰箱。 [试剂] 抗A标准血清、抗B标准血清、A型标准红细胞、B型标准红细胞、O型标准红细胞、生理盐水。以上试剂均为有合格证件的正品。 [标本收集与处理] 1．受检者血清：采集受检者静脉血2~3ml，经1000r/min离心1分钟或室温静置1小时后取上清。 2．2~5%的受检者红细胞：采集受检者静脉血或末梢血，用生理盐水制成2~5％红细胞盐水悬液备用，制备方法见本节质量控制和注意事项。 3．标本出现中度以上溶血者，为不合格标本，不能用于检测。 [实验方法与步骤] 1.ABO血型的正定型（试管法）： 　　⑴、取2支试管，分别标上抗A和抗B； 　　⑵、制备待测标本2~5%的红细胞悬液（取1支试管，加入2ml生理盐水，再加入1滴待测标本红细胞，混匀备用）； 　　⑶、在抗A管中加入2滴抗A标准血清，在抗B管中加入2滴抗B标准血清； ⑷、在抗A和抗B管中分别加入1滴已制备好的待测标本2~5%红细胞悬液； ⑸、混匀后，立即对称放入离心机中进行1000r/min离心1分钟，或室温静置1小时，再轻轻摇动试管，使沉于管底的红细胞浮起，先肉眼观察有无凝集现象，如内眼不见凝集，应将反应物倒于玻片上，再以低倍镜检查。 ⑹根据有无凝集现象判定结果如下。注意凝集强度，此有助于A、B亚型、类B或cisAB的发现。 ABO血型 抗A标准血清 抗B标准血清 A型 ＋ － B型 － ＋ O型 － － AB型 ＋ ＋ ⑺凝集强度判断标准 4十 红细胞凝集成一大块，血清清晰透明。 3十 红细胞凝集成数小块，血清尚清晰。 2十 红细胞凝块分散成许多小块，见到游离红细胞。 1十 肉眼可见大颗粒，周围有较多游离红细胞。 土 镜下可见数个红细胞凝集在一起，周围有很多 游离红细胞。 MF 混合凝集外观(mixed field)是指镜下可见少数红细胞凝集，而极大多数红细胞仍呈分散分布。 一 表示阴性，镜下未见凝集，红细胞均匀分布。 2.ABO血型的反定型（试管法）： ⑴、取3支试管，分别标上A、B和O； 　　⑵、在3支试管中分别加入2滴待测标本的血清； 　　⑶、将ABO标准红细胞轻轻地充分混匀后，在A管中加入1滴A型标准红细胞，在B管中加入1滴B型标准红细胞，在O管中加入1滴O型标准红细胞； ⑷、混匀后，对称放入离心机中进行1000r/min离心1分钟（或3400 r/min离心15秒）； ⑸、取出后，先观察是否溶血（溶血可能是阳性结果，或者是细菌污染），再轻轻摇动试管，肉眼观察有无凝集现象，肉眼不易分辨的用显微镜观察； ⑹根据有无凝集现象判定结果如下。注意凝集强度，此有助于A、B亚型、类B或cisAB的发现。 ABO血型 A型标准红细胞 B型标准红细胞 O型标准红细胞 A型 － ＋ － B型 ＋ － － O型 ＋ ＋ － AB型 － － － ⑺凝集强度判断标准 （同ABO血型的试管法正定型） [质量控制和注意事项] 1、分型标准血清试剂必须为三证齐全的合格产品，质量性能符合要求，且在有效期内使用。试剂开