试验寄生虫学粪便检查法.PPT

实验三、寄生虫学粪便检查法（三） 一、目的 通过本次实验学习掌握线虫幼虫的检查方法、学习掌握虫卵的计数方法；了解线虫幼虫的形态。 二、内容 1、学习虫卵计数法 a）简易计数法 b）麦克马斯特计数法 2、学习线虫幼虫检查法 a）幼虫培养法 b）温水引诱法 本次实验的意义： 学习虫卵计数法的操作技术，对于我们判定宿主感染寄生虫病的强度，或者检验驱虫药使用后的效果如何，都有着重要的参考价值。 1、寄生虫排卵有一定的规律性，因此，宿主所排出的粪便中虫卵的含量就会有所很大差异，而且虫卵在同一个粪样中，分布也是不均匀的； 2、粪便的浓稠程度的不同，虫卵的含量也会不同。 如果要想获得较为准确的数据，不仅要克服主观上的不足外，还要将被检宿主在24小时内所排出的粪便全部收集起来，经充分混合均匀后，称量好总量，按一定的比例来称取粪样，通过换算后，得出的结果才是较为准确的数据。 实验内容： 1、虫卵计数法：（只适用于线虫卵和球虫卵囊）　 （1）简易计数法：　 （2）斯陶尔法； （3）麦克马斯特计数法。 2、线虫幼虫检查法： （1）线虫幼虫的培养方法；　 （2）温水引诱法； （3）毛蚴孵化法： 四、操作方法 1、虫卵计数法： （1）、简易计数法： 取粪样（1g）＿加清水（10－15倍）＿搅拌均匀＿过滤＿静置（30－40分钟）＿倒去上清液＿再加饱和盐水＿混匀＿倒入青霉素瓶＿用吸管加满并使之凸出瓶口＿加上盖玻片＿静置（20－30分钟）＿垂直取下盖玻片＿镜检＿并盖上另一块盖玻片（一般要检三片以上）。 （2）、麦克马斯特计数法； 麦克马斯特计数板的规格：它由两块玻片所组成，其间隔距离为1.5mm，上面的盖玻片上一般有1－2个1 平方厘米的方格，每个计数室的体积为o.15立方厘米，容量为o.15ml。 原理: 由于计数室内充满了用漂浮液制成的粪液，因此，在计数室内体积小、比重轻的虫卵漂浮在上面，而粪渣则沉于下面，当视野感觉模糊时往往所看到的是该室的底部沉渣，当清晰见到上面的线条时，才能找到虫卵，由于有线条的规范，有效地防止了漏检或重检。 麦克马斯特操作方法： 取样（2g）＿加饱和盐水（58ml）＿充分混匀＿过滤＿混匀后立即用吸管注入计数室内＿静置（1－2分钟）＿镜检。 计算公式： 每克粪便中的虫卵数＝全部计数室的虫卵总数/计数室的个数×200 2、线虫幼虫的检查法： 方法：在平皿中垫上一层吸水纸--将含有虫卵的粪便（混匀）--放入平皿中（如粪便太干燥时洒适量的水，如太湿时应洒适量的炭末）--塑成半球状（压平并略高出平皿口）--放入恒温箱内（25－30℃，夏天可放在室内，根据情况可适当洒点水，以保持吸水纸的潮湿度）--经过7－10天的时间--就会发育成第三期幼虫。 观察: 线虫的种类很多而它们排出的虫卵，在形态、结构和大小上极为相似，因此，以虫卵来鉴别线虫的种类是较困难的，只有通过培养出第三期幼虫（即具有感染力的幼虫），才能根据幼虫的形态结构来进行鉴定。 （2）、温水引诱法： A、贝尔曼法： 该方法检出率高，适用于检查各种线虫的幼虫，包括土壤、饲料和器官内的幼虫检查。 贝尔曼分离器装制：用一个直径为10－15cm的漏斗，下接一条10－15cm长的胶管，再接一个沉淀管，并准备一个止水夹和铜滤筛。 操作方法： 取培养好的粪样（10－20g）＿用两层纱布包扎好＿置于漏斗中的铜筛中＿沿漏斗边缘加入37－40℃的温水（以淹盖粪样为佳）＿静置（1－2小时）＿夹好止水夹＿取下沉淀管＿吸去上清液＿取沉渣镜检。 如果没有沉淀管时，在加温水之前应夹好止水夹，静置（1－2小时）后，收集下面一部分水，进行离心后取沉渣镜检。 B、平皿幼虫分离法： 取培养好的粪样1－2g＿放入平皿中＿加40℃的温水（以浸没粪便为宜）＿静置（5－10′）＿去粪便＿镜检平皿中的液体。 C、直接检查法： 取少量培养好的粪样＿置于载玻片上＿滴清水＿静置（30′）＿镜检 作业： 将计算方法和检查结果写出。 * * 用吸管将粪液加满并使之凸出瓶口 1.5mm 1.5mm 麦克马斯特计数板 试管 胶管 漏斗 滤筛 *