小干扰RNA沉默钙网蛋白基因表达对肝癌细胞株.doc

RNAi沉默钙网蛋白基因抑制人肝癌细胞的增殖及侵袭能力? ? [基金项目] 国家自然科学联合基金项目（U1204815）；河南省教育厅科学技术研究重点资助项目（12A320062） [通讯作者] 翟文龙，电话：0371E-mail：ven0371@126.com 叶健文1,3,齐蕾2,3，闫冰1，梁志伟1，周闯1，李仁峰1，翟文龙1，张水军1 （450052郑州，郑州大学第一附属医院肝胆胰外科1，河南省消化器官移植重点实验室1；450052郑州，郑州大学第一附属医院内分泌科2；共同第一作者3） [摘要] ：目的 探讨钙网蛋白（calreticulin CRT）对人肝癌细胞株SMMC-7721、HepG2增殖及侵袭能力的影响。 方法 利用siRNA 沉默肝癌细胞株SMMC-7721、HepG2 CRT的表达。通过CCK-8检测细胞的增殖；采用流式细胞术检测细胞凋亡能力变化；运用Transwell侵袭小室检测细胞侵袭能力；Wertern blot方法检测CRT、p-Akt、Akt蛋白表达。结果 siRNA实验组SMMC-7721、HepG2细胞24、36、48h相对生长抑制率分别为（41.0±1.5）%、（45.5±1.1）%、（59.7±3.1）%；（33.0±2.5）%、（51.1±4.1）%、（60.8±3.1）%，与阴性对照组和空转染组比较，siRNA实验组增殖能力明显降低（p0.05）。siRNA实验组SMMC-7721、HepG2细胞24、36、48h凋亡水平分别为（42.8±4.2）%、（47.9±3.1）%、（68.2±5.1）%；（35.9±4.2）%、（58.9±3.1）%、（75.8±5.1）%，与阴性对照组和空转染组比较，实验组凋亡能力上调（p0.05）。Transwell实验证实：SMMC-7721细胞穿膜个数分别为阴性对照组（73±3.7），空转染组（67.5±3.5），siRNA 组 24、36、48h分别为（40.0±3.2）、（42.2±2.6）、（50.9±4.5）；HepG2细胞的穿膜个数分别为阴性对照组（79±4.1），空转染组（71.7±5.5），siRNA 组24、36、48h分别为（48、1±4.3）、（50.4±4.6）、（52.2±5.3），与阴性对照组和空转染组比较，实验组侵袭能力降低（p0.05）。沉默CRT后，与阴性对照组及空转染组比较，p-Akt蛋白 24、36、48h表达水平均下调，（p0.05）。 结论 沉默肝癌细胞CRT后，对细胞的增殖、侵袭能力有明显的抑制作用，同时可诱导细胞的凋亡，且与PI3K/Akt信号通路相关。 [关键词] 钙网蛋白；肝癌细胞；小干扰RNA；p-Akt Calreticulin gene silencing inhibits the proliferation and invaison of human hepatocellular caricnoma cells Ye Jianwen1,3，Qi Lei2,3，Yan Bing1，Liang Zhiwei1，Zhou Chuang1，Li Renfeng1，Zhai Wenlong1，Zhang Shuijun1（1Department of Hepatobiliary and Pancreatic Surgery，2Department of Endocrinology，the First Affiliated Hospital of Zhengzhou University；1Key Lab of Digestive Organ Transplantation of Henan Province，Zhengzhou 450052 China，3These authors contributed equally to this work） 【Abstract】 Objective To explore the effect of calreticulin on proliferation and invasion of human hepatocellular carcinoma cell line SMMC-7721、HepG2. Methods SMMC-7721、HepG2 cells were transfected with small interfering RNA. The proliferation, invasion and apoptosis of SMMC-7721、HepG2 cells were determined by using cell counting kit-8(CCK-8) assays、transwell assays