原代乳大鼠心肌细胞的培养及鉴定.docVIP

原代乳小鼠心肌细胞的分离培养及鉴定 程阔菊 黄河 杜智勇 李洪 杨天德﹡ 第三军医大学新桥医院麻醉科, 重庆 400037 摘要：目的：原代乳小鼠心肌细胞培养方法的建立，评价心肌细胞的存活状况并鉴定心肌细胞纯度。方法：应用胰酶联合胶原酶共同消化3d内C57乳小鼠心脏，台盼蓝染色判断心肌细胞存活率，α-actin免疫荧光染色鉴定心肌细胞纯度。结果：利用3d内乳鼠心脏可成功培养原代小鼠心肌细胞，台盼蓝染色显示细胞存活率95%，α-actin免疫荧光染色显示心肌细胞纯度达95%以上。结论：严格控制实验条件，可成功培养高存活率和高纯度的小鼠心肌细胞。 关键词：乳小鼠，心肌细胞，分离，纯化，培养，鉴定 Isolation, culture and identification of neonatal mouse cardiomyocytes CHENG Kuo-ju HUANG He DU Zhi-yong LI Hong YANG Tian-de Department of Anesthesiology, Xinqiao Hospital, The Third Chongqing, Abstract: Objective: To establish a method to isolate, culture and identify cardiomyocytes from neonatal mouse, estimate the cardiomyocytes survival rate, and identify the purity of cardiomyocytes. Methods: Neonatal C57 mouse heart(within 3 days) was digested using trypsin and collagenase. Cardiomyocytes survival rate was estimated by trypan blue staining, and cardiomyocytes purity was identified by α-actin immunofluorescence staining. Results: Mouse cardiomyocytes can be successfully isolated and cultured using neonatal mouse within 3 days. Trypan blue staining showed cardiomyocytes survival rate was 95%, and cardiomyocytes purity was more than 95% demonstrated by α-actin immunofluorescence staining. Conclusion: Under the strict experimental conditions, mouse cardiomyocytes can be successfully isolated and cultured with high survival rate and high purity. Key words: neonatal mouse, cardiomyocytes, separation, purification, culture, identification 基金项目：国家自然科学基金面上项目 作者简介：程阔菊（1984-），女，四川达州人，药师，主要从事心肌保护方面的研究。E-mail:chengkuoju@163.com ﹡通讯作者，杨天德，男，教授，博士生导师，主要从事心肌保护方面的研究。Tel：023 E-mail:31011@. 各种基因敲除及转基因小鼠已广泛应用于心血管疾病动物模型的建立，已为心血管疾病机制的研究作出了巨大贡献。体外心肌细胞培养作为一种体外实验研究模型，可以 排除神经、体液的干扰独立的从细胞和分子水平研究心血管疾病的发生、发展机制，但由于小鼠心肌细胞的分离和培养比较困难，所以一直来限制了我们在细胞生物学水平对心血管疾病的深入研究。本实验室在以往的经验基础上，摸索出了一套成熟可行、简单可靠的小鼠心肌细胞培养方法，获得的心肌细胞存活率高和纯度高。本文对此培养方法做一简单介绍，并对其中的关键影响因素做详细的探讨。 材料和方法 实验动物 1～3d龄野生型C57新生乳鼠，SPF 级，由第三军医大学实验动物中心提供，合格证号：SCXK(渝)2007-0003。 主要仪器与试剂 显微眼用镊、眼科剪、显微镊、显微剪（上海医疗器械集团有限公