人颗粒溶素的克隆原核表达及其抗体制备-检验医学.PDFVIP

垫壁匿堂!螋!至墨丝鲞釜!塑生!坚塑翌!型业!!!盟：!!!丝：坐!： 62 文章编号：1673{640(2007)05旬571—04中圈分类号：R446 文献标识码：A 人颗粒溶素的克隆、原核表达及其抗体制备 钱垮，邓安梅，陈孙孝．王燕，周晔，陈燕，谷明莉，仲人前 (上海第二军医大学附属长征医院实验诊断科，上海200003) 摘要：目的构建人颗粒溶素(GNLY)质粒．进行原核表达，纯化得到相对分子质量9000目的片段，免疫新 西兰大白兔得到兔抗cNLY多克隆抗体。方法分离外周血单个核细胞，用卡介苗和白细胞介素一2(IL．2)刺激， 培养12d。抽提细胞RNA，通过逆转录聚台酶链反应(m：PcR)获得含有222bp的GNLYcDNA，克隆到pMDl8一 bIot)进行鉴定。用纯化的蛋白免疫新西兰大白兔．得到抗-GNLY特异性多抗。结果成功构建了p矾再}々j?￡= 婚醢}斧塞誊强灌；酗鞫j月礤蠼嘣婀强喜降毒■罐蛭强世嗯鸳哩性嘣嚏[t：弹蝇个组氨酸的融合蛋白并进行纯化，最后免j芟兔得到抗一GNLY特异性多 抗，并经Westernblot验证正确。结论获得了纯化的GNLY蛋白和抗一GNLY多抗血清，为今后对疾病中细胞毒 性T淋巴细胞(CTL)和自然杀伤(NK)细胞活性的研究打下了基础。 关键词：颗粒溶素：基因表达；外周血单个核细胞 eDNA andrecombinantofhuman and ofantiserttm aranulysin doni．g expression preparation QtAN Cheng，DENGAnmel，CHENSu“iao，WANGYan，ZHOU％，CHEN‰，GUMingIi，ZHONGRenqmn．(D华Ⅲ一 Second Medizal trteftt矿lⅢboratery历昭Mb，Changzheng胁甲叫，theMUuary University，Shanghai200003，Ch／na) ToclonethecDNAofhuman GNLYinEsche- Abstract：Objective granulysin(GNLY)，thenexpressthe9000 lltlOrlo- r／ch／a immunizerabbitto anti·GNLY Human blood co／／．and antibody．Methods prepare polyclonal peripheral for inactivated tuberculosisandinterleukin- nuclear cultured12 by cells(PBMC)wefedays，stimulated Mycobacterium mada222 with w蛆obtainedrcvc啪 2．Thent0缸BNAw珏exacted cDNA bp gCglmenlgranulysin-specificprimers by be