伤寒沙门菌sRNAS2959增强细菌动力和生物膜形成-临床检验杂志.PDFVIP

临床检验杂志２０１８年１０月第３６卷第 １０期　 ＣｈｉｎＪ Ｃｌｉｎ Ｌａｂ Ｓｃｉ，Ｓｅｐ． ２０１８，Ｖｏｌ．３６，Ｎｏ．１０ ·７２１· ＤＯＩ：１０．１３６０２／ ｊ．ｃｎｋｉ．ｊｃｌｓ．２０１８．１０．０４ ·研究生园地 · 伤寒沙门菌 ｓＲＮＡ Ｓ２９５９增强细菌动力和生物膜形成 能力∗ １，２ １ １ 陆仁飞 ，孙嘉瑶 ，黄新祥 （１． 江苏大学医学院，江苏镇江２１２０１３；２． 南通市第三人民医院检验科，江苏南 通２１６００６） 摘要：目的　 研究伤寒沙门菌小ＲＮＡ（ｓＲＮＡ） Ｓ２９５９对细菌动力以及生物膜形成能力的影响。 方法　 利用Ｒｅｄ重组系统制备 伤寒沙门菌ｓＲＮＡ Ｓ２９５９缺陷株，同时制备ｓＲＮＡ Ｓ２９５９缺陷株的空载体株和回补株等相关菌株。 通过ｓＲＮＡ Ｓ２９５９缺陷株和 野生株的生长曲线实验观察ｓＲＮＡ Ｓ２９５９缺失后对细菌生长的影响；通过细菌ｓＲＮＡ Ｓ２９５９缺陷株、空载体株、回补株的泳动 能力实验和生物膜实验观察ｓＲＮＡ Ｓ２９５９对细菌动力以及生物膜形成能力的影响；再用定量ＰＣＲ（ｑＰＣＲ）方法检测细菌鞭毛 相关基因在ｓＲＮＡ Ｓ２９５９相关菌株中的表达水平。 结果　 成功制备ｓＲＮＡ Ｓ２９５９缺陷株和回补株；ｓＲＮＡ Ｓ２９５９缺陷株和野生 株在ＬＢ和ＴＳＢ液体培养基中的生长曲线无明显差异；与野生株相比，ｓＲＮＡ Ｓ２９５９缺陷株的泳动能力和生物膜形成能力下调 （Ｐ＜０．０５），而回补株的泳动能力和生物膜形成能力较缺陷株显著增加（Ｐ＜０．０５）；ｑＰＣＲ 结果显示，高表达ｓＲＮＡ Ｓ２９５９后，细 菌鞭毛相关基因（ｆｌｈＤ、ｆｌｉＡ和ｆｌｊＢ）的ｍＲＮＡ 水平分别上调大约４、３和６倍。 结论　 伤寒沙门菌ｓＲＮＡ Ｓ２９５９促进鞭毛的表 达，进一步上调伤寒沙门菌动力以及生物膜的形成能力。 关键词：伤寒沙门菌；ｓＲＮＡ；动力；生物膜 中图分类号：Ｒ４４６．５　 　 　 　 文献标志码：Ａ ｓＲＮＡ Ｓ２９５９ ｒｅｇｕｌａｔｅｓ ｍｏｔｉｌｉｔｙ ａｎｄ ｂｉｏｆｉｌｍ ｆｏｒｍａｔｉｏｎ ａｂｉｌｉｔｙ ｉｎ Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｅｎｔｅｒｉｃａ ｓｅｒｏｖａｒ Ｔｙｐｈｉ １，２ １ １ ＬＵＲｅｎｆｅｉ ，ＳＵＮ Ｊｉａｙａｏ ，ＨＵＡＮＧＸｉｎｘｉａｎｇ （１． Ｊｉａｎｇｓｕ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｓｃｈｏｏｌ ｏｆ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｚｈｅｎｊｉａｎｇ ２１２０１３，Ｊｉａｎｇｓｕ；２． Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ ＣｌｉｎｉｃａｌＬａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｔｈｅ Ｔｈｉｒｄ Ｐｅｏｐｌｅ′ｓ Ｈｏｓｐｉｔａｌ ｏｆ Ｎａｎｔｏｎｇ，Ｎａｎｔｏｎｇ ２１２００６，Ｊｉａｎｇｓｕ，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ　 Ｔｏ ｅｘｐｌｏｒｅ ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｓＲＮＡ Ｓ２９５９ ｏｎ ｍｏｔｉｌｉｔｙ ａｎｄ ｂｉｏｆｉｌｍ ｆｏｒｍａｔｉｏｎ ａｂｉｌｉｔｙ ｉｎ Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｅｎｔｅｒｉｃａ ｓｅｒｏｖａｒ Ｔｙｐｈｉ． Ｍｅｔｈｏｄｓ　 ｓＲＮＡ Ｓ２９５９ ｄｅｌｅｔｅｄ ｍｕｔａｎｔ ｗａｓ ｇｅｎｅｒａｔｅｄ ｔｈｒｏｕｇｈ Ｒｅｄ ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ｓｙｓｔｅｍ，ａｎｄ ｅｍｐｔｙ ｖｅｃｔｏｒ ｓｔｒａｉｎ ａｎｄ ｃｏｍｐｌｅ⁃ ｍｅｎｔ ｓｔｒａｉｎ ｏｆ ｓＲＮＡ Ｓ２９５９ ｄｅｌｅｔｅｄ ｍｕｔａｎｔ ｗｅｒｅ ｐｒｅｐａｒｅｄ． Ｔｈｅ ｔｉｍｅ ｇｒｏｗｔｈ ｃｕｒｖｅ ａｓｓａｙ ｏｆ ｓＲＮＡ Ｓ２９５９ ｄｅｌｅｔｅｄ ｍｕｔａｎｔ ａｎｄ ｗｉｌｄ⁃ｔｙｐｅ ｓｔｒａｉｎ ｗｅｒｅｕｓｅｄｔｏ ｏｂｓｅｒｖｅｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｓＲＮＡ Ｓ２９５９ ｏｎｂａｃｔｅｒｉａｌ ｇｒｏｗｔｈ．Ｔｈｅ ｓｗｉｍｍｉｎｇ ｍｏｔｉｌｉｔｙ ａｎｄｂｉｏｆｉｌｍｆｏｒｍａｔｉｏｎ ａｂｉｌｉｔｙ ｏｆ ｓＲＮＡ Ｓ２９５９ ｄｅｌｅｔｅｄｍｕｔａｎｔ，ｅｍｐｔｙ ｖｅｃｔｏｒ ｓｔｒａｉｎ，ａｎｄ ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔｅｄ ｓｔｒａｉｎｗｅｒｅ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｄｂｙ ｔｈｅ ｓｗｉｍｍｉｎｇ ｍｏｔｉｌｉｔｙ ａｓｓａｙ ａｎｄｂｉｏｆｉｌｍｆｏｒ⁃ ｍａｔｉｏｎ ａｓｓａｙ． Ｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｌｅｖｅｌｏｆｂｉｏｆｉｌｍｆｏｒｍａｔｉｏｎ