艾德KRAS试剂盒说明书.docxVIP

【产品名称】 通用名称：人类KRAS基因7种突变检测试剂盒（荧光PCR法） 英文名称：Human KRAS Gene 7 Mutations Fluorescence Polymerase Chain Reaction (PCR) Diagnostic Kit 【包装规格】 12测试/盒 【预期用途】 KRAS基因是人体肿瘤中常见的致癌基因。该基因的突变常见于多种恶性肿瘤，在肺癌患者中的突变率为15～30%，在结直肠癌患者中的突变率为20～50%。导致KRAS处于激活状态的突变主要位于第12和13密码子上。KRAS基因突变一般会使肺癌患者对EGFR酪氨酸激酶抑制剂产生耐药，使结直肠癌患者对抗EGFR抗体类药物产生耐药。但是，2010年10月的最新研究发现第13密码子上的Gly13Asp（G13D）突变亦对抗EGFR抗体类药物有治疗反应性（参见：De Roock. W. JAMA. 2010;304(16):1812-1820）。因此，KRAS基因突变检测能提高肿瘤临床治疗的针对性，降低治疗费用，节省宝贵的治疗时间。 大部分肿瘤的突变都是体细胞突变，突变细胞往往与野生型细胞混杂在一起，因此所提取的DNA常带有大量野生型DNA，所以对体细胞突变检测需要较高的特异性，而目前广泛使用的直接测序法检测能力有限，不能完全满足临床需要。 本试剂盒用于检测人类KRAS基因的12和13密码子上7种热点体细胞突变（见表1），试剂盒以DNA为检测样本，提供突变状态的定性评估。辅助临床医生筛选出可受益于肿瘤靶向药物的大肠癌等癌症患者。该产品用于组织中提取DNA的KRAS基因7种突变的检测，为临床医生对大肠癌或肺癌患者选择肿瘤靶向药物治疗提供参考。 表1 人类KRAS基因的12和13密码子上7种热点体细胞突变 突变名称 氨基酸变化 碱基变化 Cosmic ID 公司命名 Gly12Asp 甘氨酸到天门冬氨酸 GGTGAT 521 12-2-A Gly12Ala 甘氨酸到丙氨酸 GGTGCT 522 12-2-C Gly12Val 甘氨酸到缬氨酸 GGTGTT 520 12-2-T Gly12Ser 甘氨酸到丝氨酸 GGTAGT 517 12-1-A Gly12Arg 甘氨酸到精氨酸 GGTCGT 518 12-1-C Gly12Cys 甘氨酸到胱氨酸 GGTTGT 516 12-1-T Gly13Asp 甘氨酸到天门冬氨酸 GGCGAC 532 13-2-A 【检测原理】 本试剂盒基于实时PCR平台结合了特异引物和双环探针两种技术，检测DNA样品中含有的突变基因。利用特异引物对突变靶序列进行高精准PCR扩增放大，与此同时，利用双环探针对扩增产物进行检测，结合特别的PCR反应程序和高特异Taq酶的使用，在实时PCR平台上实现对样品DNA中突变的检测，以达到对稀有突变检测的高特异性和高灵敏度，即高的选择能力。 【主要组成成份】 试剂盒采用8联PCR管设计，每一个8联PCR管检测一个样品，8联管的1-7(或A-G，或8联PCR管两端各有一个小孔，小孔居侧端为1号管，小孔居中端为8号管)管内装有相应的KRAS基因7种突变检测和内控试剂，突变由FAM信号指示，内控由HEX（或VIC）信号指示；8（或H）号管作为DNA提取质量的外控检测管，亦由FAM信号指示，内控和外控作为对试剂、DNA质量以及操作本身的质控，选择的检测区域是人类KRAS基因相对保守 的区段，约100bp，这样即便DNA有降解，外控和内控仍然能够最真实地反检测所用DNA的质量非常重要。由于肿瘤的复杂性，所采集的临床样品应KRAS基因有效的DNA量。每个PCR反应管内均含有5～10 pM特异性引往往会混有正常组织细胞，不同类型样品正常细胞混杂程度不同，而且提取的物、20 pM双环探针、12.5 μM dNTPs、175 μM氯化镁、1 mM硫酸铵、2.5 mMDNA纯度和质量也因样品类型而改变，尤其是用福尔马林固定的石蜡切片样氯化钾和纯化水等。（详见表2和表3） 品，福尔马林会对DNA有交联和降解作用，因此请按下面推荐样品类型顺序表2 试剂盒组成 收集样品并提取DNA用于检测，客户可根据临床实际样品的情况进行选择。 试剂盒规格 12测试 1. 推荐样品类型顺序：新鲜病变组织冰冻病理切片石蜡包埋病理组织或切8联PCR管反应条 12条 片。 Taq酶（KRAS） 35 μL 2. 推荐使用商业化的试剂盒来提取人类基因组DNA。所提DNA需用紫外分光KRAS阳性质控品 250 μL 光度计测定浓度，其DNA的OD260/OD280在1.8～2.0。提取完的DNA建议立表3 8联PCR管反应条的组成 即进行检测，否则请于-20℃以下保存，保存时间不要超过6个月。 管号 检测试剂 体积 荧光信号 3. 从新鲜