《选修3》专题一：基因工程——PCR技术”考点精析.docVIP

PAGE \* MERGEFORMAT PAGE \* MERGEFORMAT 1 “PCR技术”考点精析 在2018年考纲中将“PCR技术”列入考试范围，应引起重视。PCR是一种体外迅速扩 增DNA片段的技术，能以极少量的DNA为模板，在几小时内复制出上百万份的DNA拷贝。 一、PCR（多聚酶链式反应）技术原理 双链DNA单链DNA加热，双螺旋结构解体缓慢冷却，分离的DNA链重新结合PCR 双链DNA 单链DNA 加热，双螺旋结构解体 缓慢冷却，分离的DNA链重新结合 二、PCR反应的条件 1.模板：DNA两条链提供复制的模板。 2.酶：解旋酶打开DNA双链，热稳定DNA聚合酶催化合成DNA子链。 3.原料：4种脱氧核苷酸（A、T、C、G）用于合成子链的原料。 4.能量：ATP为复制过程提供能量。 5.引物：使DNA聚合酶从引物的3′端开始连接脱氧核苷酸。 6.温度和PH:温度为90～95℃→55～60℃→70～75℃，缓冲溶液维持反应的pH值不变。 三、PCR反应的过程 PCR一般要经历三十多次循环，每次循环都包括变性、复性、延伸三步。在循环之前，常要进行一次预变性，以增加大分子模板DNA彻底变性的概率。PCR的反应过程都是在PCR扩增仪中完成的。 1.变性：当温度上升到90℃以上时，双链DNA解聚为单链，(如下图)。 2.复性：系统温度下降至50℃左右时，两种引物通过碱基互补配对与两条单链DNA结 合，(如下图)。 3．延伸：系统温度上升至72℃左右时，溶液中的四种脱氧核苷酸(A、T、G、C)在热稳定DNA聚合酶的作用下，根据碱基互补配对原则合成新的DNA链，(如下图)。 第一轮的产物作为第二轮的模板，第二轮的产物作为第三轮的模板，第二轮循环开始，上一次循环的产物也作为模板参与反应，并且由引物Ⅰ延伸而成的DNA单链会与引物Ⅱ结合，进行DNA的延伸。DNA聚合酶只能特异地复制处于两个引物之间的DNA序列，是这段特点长度的序列呈指数扩增。PCR实验中使用的设备、缓冲液等在使用前都要高压灭菌。 四、PCR扩增的结果及含量计算 1．结果：变性、复性、延伸三步反应完成后，一个DNA分子就变成了2个DNA分子随 着重复次数的增加，DNA分子就以2n的形式增加。 2．DNA含量计算公式：DNA含量（μg／mL）＝50*×(260nm的读数) ×稀释倍数。 五、PCR扩增与DNA复制 项目 DNA复制 PCR扩增 不 同 点 场所 细胞内 细胞外 能量 ATP提供能量 不需ATP提供能量 酶 解旋酶、DNA聚合酶 耐高温的TaqDNA聚合酶 是否有转录 伴有转录,产生引物 无转录,需加入两种引物 特点 边解旋边复制，半保留复制 体外迅速扩增 循环次数 受生物体自身控制 30多次 缓冲液 不需要 需要人为控制 设备 无 严格控制温度变化的温控设备 相 同 点 原料 四种脱氧核苷酸 复制原理 严格遵循碱基互补配对原则 模板 DNA为模板 引物 都需要与模板相结合的引物 1、利用PCR技术可获得目的基因，下列相关叙述正确的是（　　） A．在用PCR技术扩增DNA时，DNA的复制过程与细胞内DNA的复制类似 B．PCR反应体系中需添加磷酸、脱氧核糖和含氮的碱基作为原料 C．PCR 体系中需要添加从受体细胞中提取的解旋酶和DNA聚合酶 D．PCR反应中温度的周期性改变是为了DNA聚合酶催化不同的反应 2、PCR是一种体外快速扩增DNA的方法，用于放大特定的DNA片段，数小时内可使目的基因片段扩增到数百万个。PCR需要模板DNA、引物、脱氧核苷酸和DNA聚合酶等条件。下图为模板DNA分子及2种引物，请据图回答相关问题： （1）PCR的全称是 。PCR与体内DNA复制的不同之外主要表现在温度环境的不同，在PCR技术中先用95 ℃高温处理的目的是 ，而这一过程在细胞内是通过 实现的。 （2）在PCR技术中所需要的引物实质上是一种 。请在图中绘出引物结合的位置。 （3）若将1个DNA分子拷贝10次，则需要在缓冲液中至少加入 个引物。 （4）DNA子链复制的方向是 ，这是由于 。 3、PCR是一种DNA体外扩增技术。 1988年，PCR仪问世，并被广泛应用于基因扩增和DNA序列测定。如图是PCR技术示意图，请回答下列问题：（11分/6min） ①标准的PCR过程一般分为　 　、　 　、　 　三大步骤。 ②引物是此过程中必须加入的物质，从化学本质上说，引物是一小段　 　。 微量DNA样品DNA互补链分离开为单链以单链为模板合成