06-第六讲-基因工程.ppt

转黄瓜抗青枯病基因的马铃薯 4.利用转基因改良植物的品质 提高观赏价值 是指把人或哺乳动物的某种基因导入到哺乳动物 (如鼠、兔、羊和猪) 的受精卵里，目的基因若与受精卵染色体DNA整合，细胞分裂时，该基因随染色体的倍增而倍增，使每个细胞中都带有目的基因，使性状得以表达，并稳定地遗传给后代，从而获得基因产品。这样一种新的个体，称为转基因动物。 7. 转基因动物？ 转基因动物主要用于生产器官移植的研究，生产对人类有价值的产品，使动物具有某些可遗传的抗性对付某些疾病与不良环境，目前出于对安全性考虑，禁止将转基因动物进入食品。目前将人的某些基因转入动物，生产某些蛋白类药物已经广泛实施。一般动物转基因多采用受精卵注射法，将目的基因直接注射入动物的受精卵中，有一部分生产出的动物细胞内含有这些目的基因。还有胚胎干细胞法，将目的基因转化胚胎干细胞，再进行胚发育，一旦成为生殖细胞，可获得稳定的遗传。 动物基因工程前景广阔 1.用于提高动物生长速度 2.用于改善畜产品的品质 3.用转基因的动物生产药物 如转基因牛分泌的乳汁，乳糖含量降低，营养成分不变 转基因动物的乳腺。 就基因药物而言，最理想的表达场所是哪里？ 转基因牛 乳汁中含有人生长激素的转基因牛 (阿根廷) 1）乳腺是一个外分泌器官，乳汁不进入体内循环，不会影响转基因动物本身的生理代谢反应。 2）从乳汁中获取目的基因产物，产量高，易提纯，表达的蛋白质已经过充分的修饰加工，具有稳定的生物活性。 3）从乳汁中源源不断获得目的基因的产物的同时，转基因动物又可无限繁殖。 为什么乳腺能成为基因药物最理想的表达场所呢？ 繁殖具有抗病能力、高产仔率、高产奶率和高质量的皮毛等优良品质的转基因动物。 该过程的重要步骤是通过感染或显微注射技术将重组DNA转移到动物受精卵中。 基因工程在畜牧养殖业上的应用主要是什么？ 将人的生长激素基因和牛的生长素基因分别注射到小白鼠受精卵中，得到的“超级小鼠”。 转基因食品 随着转基因作物的普及，目前世界已经有很多食品中含有转基因成分，如食用油、土豆泥、番茄酱、豆制品，海关检测表明60%的进口食品中含有转基因成分。转基因食品的安全性 目前世界上尚未发现转基因食品对人类健康的危害，但是安全性仍然需要长期监测。 各国制定了相关法规，中国《农业转基因生物安全管理条例》、《农业转基因生物标志管理办法》（包括大豆、玉米、油菜、番茄及其加工产品） 重组DNA技术的一般操作步骤有：(1)获得目的基因；(2)构建重组质粒；(3)转化受体细胞；(4)筛选和鉴定转化子；(5)培养转化细胞获得所需性状或所需产物。 获得目的基因的方法有：提取总DNA构建基因文库并从中调用；以mRNA为模板合成互补DNA片段；利用PCR特异性扩增所需目的基因片段等。用紫外分光光度计测定DNA溶液的纯度和浓度。 用限制性内切酶识别并切开核酸序列特定位点，将外源基因插入到载体中，用重组载体转化宿主细胞，外源基因将随宿主的繁殖而复制，这种过程称为基因的克隆。 凝胶电泳是用于分离、纯化和鉴定DNA片段最常规的实验技术。可依据DNA分子的大小来使其分离。还可以利用DNA杂交技术直接鉴定带有重组质粒的细菌克隆。 利用载体法或基因直接转移等技术将外源目的基因转入合适的宿主细胞中进行表达，获得所需表达产物或所需性状。用Southern杂交对转基因生物外源目的基因进行检测分析。 本章摘要 变性、退火、延伸三步曲 变性：双链DNA解链成为单链DNA 退火：部分引物与模板的单链DNA的特定互补部位相配对和结合 延伸：以目的基因为模板，合成互补的新DNA链 3.1.3 聚合酶链式反应（PCR） 每一轮聚合酶链式反应可使目的基因片段增加一倍 30轮循环可获得—— 230（1.07×109)个基因片段 3.1.3 聚合酶链式反应（PCR） PCR技术的发明 PCR的发明是DNA操作技术的革命 美国Mullis教授 开汽车时的联想 逶迤崎岖的山路——DNA双螺旋 行驶的汽车——一小段DNA引物 …… 1988年发明了PCR技术 1993年获得诺贝尔奖 以质粒作载体为例 用与提取目的基因相同的限制酶切割质粒使之出现一个切口，将目的基因插入切口处，让目的基因的黏性末端与切口上的黏性末端互补配对后，在连接酶的作用下连接形成一个环形的重组DNA分子。 提取质粒并用限制酶切割 用连接酶将目的基因和质粒连接 3.2 构造重组DNA分子 用质粒构建重组DNA分子 3.3 将目的基因导入受体细胞并扩增 基因工程中常用的受体细胞有大肠杆菌、枯草杆菌、土壤