试验室常用缓冲液配置方法11MTris-HClpH747680组份浓度.DOC

实验室常用缓冲液配置方法 1)1 M Tris-HCl (pH7.4, 7.6, 8.0)组份浓度：1 M Tris-HCl配制量：1 L 配制方法： 1. 称量121.1 g Tris置于1 L烧杯中。 2. 加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。 3. 按下表量加入浓盐酸调节所需要的pH值。 PH值 浓HCl 7.4 约70ml 7.6 约60ml 8.0 约42ml 4. 将溶液定容至1 L。 5. 高温高压灭菌后，室温保存。 注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大，温度每升高1℃，溶液的pH值大约降低0.03个单位。 2)10×TE Buffer (pH7.4, 7.6, 8.0)组份浓度：100 mM Tris-HCl, 10 mM EDTA配制量：1 L 配制方法： 1. 量取下列溶液，置于1 L 1M Tris－HCl Buffer（PH7.4，7.6，8.0） 100ml 500mM EDTA(PH8.0) 20ml 2. 向烧杯中加入约800 ml的去离子水，均匀混合。 3. 将溶液定容至1 L后，高温高压灭菌。 4. 室温保存。 3)1.5 M Tris-HCl (pH8.8)组份浓度：1.5 M Tris-HCl配制量：1 L 配制方法： 1. 称量181.7 g Tris置于1 L烧杯中。 2. 加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。 3. 用浓盐酸调节pH值至8.8。 4. 将溶液定容至1 L。 5. 高温高压灭菌后，室温保存。 注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大，温度每升高1℃，溶液的pH值大约降低0.03 4)3 M 醋酸钠(pH5.2)组份浓度：3M 醋酸钠 配制量：100ml配制方法： 1.称量40.8g NaAc·3H2O置于100-200ml烧杯中，加入月40ml的去离子水搅拌溶解 2.加入冰醋酸调节pH值至5.23.加去离子水将溶液定容至100ml4高温高压灭菌后，室温保存。 5)PBS Buffer组份浓度：137 mM NaCl, 2.7 mM KCl, 10 mM Na2HPO4, 2 mM KH2PO4配制量：1 L 配制方法： 1. 称量下列试剂，置于1 L烧杯中。 NaCl 8g KCl 0.2g Na2HPO4 1.42g KH2PO4 0.27g 2. 向烧杯中加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。 3. 滴加浓盐酸将pH值调节至7.4，然后加入去离子水将溶液定容至1 L。 4. 高温高压灭菌后，室温保存。 注意：上述PBS Buffer中无二价阳离子，如需要，可在配方中补充1 mM CaCl2和0.5 mM MgCl2。 6)10 M 醋酸铵 组份浓度：10 M 醋酸铵 配制量：100 ml配制方法： 1. 称量77.1 g醋酸铵置于100～200 ml烧杯中，加入约30 ml的去离子水搅拌溶解。 2. 加去离子水将溶液定容至100 ml。 3. 使用0.22 mm滤膜过滤除菌。 4. 密封瓶口于室温保存。 注意：醋酸铵受热易分解，所以不能高温高压灭菌。 7)苯酚/氯仿/异戊醇 (25 : 24 : 1)配制方法： 1. 说明：从核酸样品中除去蛋白质时常常使用苯酚/氯仿/异戊醇（25 : 24 : 1)。氯仿可使蛋白质变性并有助于液相与有机相的分离，而异戊醇则有助于消除抽提过程中出现的气泡。 2. 配制方法：将Tris-HCl平衡苯酚与等体积的氯仿/异戊醇（24 : 1）混合均匀后，移入棕色玻璃瓶中4℃保存。 8）10％ (W/V) SDS组份浓度：10％ (W/V)SDS配制量：100ml配制方法： 1.称量10g高纯度的SDS置于100-200ml烧杯中，加入约80ml的去离子水，68℃加入溶解 2.滴加浓盐酸调节pH值至7.23.将溶液定容至100ml后，室温保存。 9）2 N NaOH组份浓度：2 N NaOH配制量：100 ml配制方法： 1. 量取80 ml去离子水置于100～200 ml塑料烧杯中（NaOH溶解过程中大量放热，有可能使玻璃烧杯炸裂)。 2. 称取8 g NaOH小心地逐渐加入到烧杯中，边加边搅拌。 3. 待NaOH完全溶解后，用去离子水将溶液体积定容至100 ml。 4. 10）2.5 N HCl组份浓度：2.5 N HCl配制量：100 ml配制方法： 1. 在78.4 ml的去离子水中加入21.6 ml的浓盐酸（11.6 N)，均匀混合。 2.