团头鲂肠黏膜益生乳酸菌的分离及体外抗逆性研究.PDFVIP

第28卷第7期 水产 科 学 V01．28NO．7 2009年7月 FISHERIESSCIENCE Jul．2009 团头鲂肠黏膜益生乳酸菌的分离及体外抗逆性研究 张洪波1，单晓枫1，钱爱东1，韩 云2 (1．吉林农业大学动物科技学院，吉林长春 130118；2．通榆县瞻榆镇畜禽防疫 服务中心，吉林 自城137200) 摘要：从团头鲂肠黏膜上分离筛选出2株对嗜水气单胞菌有较强的抑制作用的乳酸菌菌株JK一1和 JK-2。通过耐受胆盐、耐受pH值、耐受蛋白酶和耐高温等试验对这2株乳酸菌进行体外抗逆性试验研 究。其中在胆盐耐受性试验中，JK一1和JK-2在胆盐浓度0．4％、培养4h时仍有35％以上的存活率； 在pH值耐受性试验时。2株乳酸菌均可在一定的酸性和碱性条件下存活；胰蛋白酶对2株菌的存活率 没有影响；在70℃的高温中．2株乳酸菌均有一定的耐受性。 关键词：团头鲂；乳酸菌；分离；抗逆性 中图分类号：Q939．92 文献标识码：A 文章编号：1003一iiii(2009)07-0395—04 乳酸菌(Lnc￡06口c饥“5)作为益生菌，其功效已段，剖开，用无菌载玻片刮取肠黏膜，加入适量PBS 在人类及畜牧业等方面达成共识。但在水产养殖 稀释，制成原液。 业，其起步较晚，目前仍有许多问题亟待解决。在 1．2．2菌种的分离 国内的水产业，乳酸菌的研究与应用大多集中在海 将原液进行倍比稀释，取原液、10倍稀释液、 水养殖[1{]，而淡水养殖，尤其是团头鲂(Megalo—100倍稀释液各0．1ml，分别涂布于酸化胆盐MRS brama 培养基，30℃厌氧培养48h，至长出单个菌落，挑 amblgcephala)鱼源的乳酸菌的研究，目前 尚未见报道。有专家提出了“最好的菌种来源是分 取不同菌落进行革兰氏染色，镜检，淘汰革兰氏阴 离自同种动物的胃肠道”的观点【3]，而这些菌株也 性菌。对革兰氏阳性菌进行纯培养后，置于4℃冰 必须能耐受动物自身胃肠道的不利因素。基于此， 箱备用。 本研究将从团头鲂的肠黏膜上分离筛选的2株益 1．2．3菌种的鉴定[53 生菌作为候选菌株，并在体外进行抗逆性试验，旨 通过触酶试验，硝酸盐还原试验，明胶液化试 在为筛选出团头鲂的高效益生菌株提供理论依据。 验，联苯胺试验，吲哚试验，硫化氢试验，葡萄糖产 min生长试验，6．5％ 酸产气试验，15、45℃的30 1材料与方法 NaCl耐受试验，pH9．2、9．6生长试验，美蓝还原 1．1材料 试验，运动性观察的试验，再根据各种糖的发酵试 试验动物：试验用团头鲂，健康无伤，体质量 验，结果与《伯杰细菌鉴定手册》[63和《乳酸细菌的 1．0kg／尾，采自长春某渔场。 分类鉴定与实验方法》[73对照，对1．2．2分离的菌 指示菌：嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophi- 株进行鉴别。 la)，由吉林农业大学预防兽医学实验室保存。 1．3乳酸菌的体外抑菌试验 培养基[4]：乳酸菌选择(MRS)肉汤培养基，乳 1．3．1乳酸菌的活化 酸菌选择(MRS