第六章基因诊断与基因治疗.ppt

* 第 六 章 基因诊断与基因治疗 Genetic Diagnosis and Gene Therapy 第 一 节 基 因 诊 断 Genetic Diagnosis 特点 针对性强 特异性强 灵敏度高 适应性强 一、基因诊断的概念和特点 定义 利用现代分子生物学技术和方法，直接检测受检 者某一特定基因的结构(DNA水平)及其功能(RNA水 平，表达水平)是否正常，从而对疾病作出诊断的方 法。是病因的诊断。 二、基因诊断的原理和方法 1、基因诊断的原理： n n DNA诊断----检测相关基因的机构及其表达 功能特别是RNA产物是否正常。 RNA诊断----对表达产物mRNA质和量变化的 分析。 2、基因诊断的常用方法 n n n n 核酸分子杂交技术 聚合酶链反应 (PCR) 基因测序 基因芯片等 下面分别介绍： n DNA诊断 n RNA诊断 （1）DNA诊断 n n 限制性内切酶谱分析法 PCR/单链构象多态性分析（SSCP） (single strand conformation polymorphism, SSCP) n DNA限制性长度多态性(restriction fragment length polymorphism, RLFP)分析 n 等位基因特异寡核苷酸探针 (allele specific oligonucleotide, ASO) n 斑点杂交 5′ 5′ 3′ 3′ 正常基因 突变基因（密码由GAG突变成GTG） 1.15kb × 1.35kb 限制性内切酶谱分析法 镰状红细胞贫血患者基因组的限制性酶切分析 MstⅡ酶切位点 n 已知限制酶MstII 识别序列 CCTG AGG MstII 1.15kb 1.35kb x n n n n n n n CCTGTGG 突变后不能识别， 酶切位点消失，限制酶切片段长度发生变化。 + 0.2kb 正常人 突变携带着 患者 镰状红细胞贫血患者基因组的限制性酶切分析 ﹣ 1.35kb 1.15kb PCR/单链构象多态性分析（SSCP） PCR产物变性后 经聚丙烯酰胺凝胶电泳 正常基因和变异基因的迁移位置不同 可分析确定致病基因的存在 DNA限制性长度多态性(restriction fragment length polymorphism，RLFP）分析法 ASO探针诊断 已知突变Gene部位和性质，合成寡和苷酸 探针，32P标记，进行Southern Blot 杂交/ 斑点杂交。 Normal βΑGene Probe——与正常 βΑ杂交 Mutation βS Gene Probe——与异常 βS杂交 斑点杂交结果： βΑ/βΑ βΑ/βS βS/βS 正常探针 突变探针 （2）RNA诊断 n n RNA印迹（Northen blot） 是检测基因是否表达、表达产物 mRNA的大小及基因表达的效率。 RT-PCR 三、基因诊断的应用 n n n n n 遗传疾病（如：血友病） 肿瘤（如：慢粒、白血病） 感染性疾病，传染性流行病（如：HIV） 器官移植组织配型 法医学中个体识别、亲子鉴定 第 二 节 基 因 治 疗 Gene Therapy 定义 早期是指用正常的基因整合入细胞基因 组，以校正和置换致病基因的一种治疗方法。 目前广义上来讲是指将某种遗传物质转 移到患者细胞内，使其在体内发挥作用，以 达到治疗疾病目的的方法。 一、基因治疗的概念 二、基因治疗的基本方法 原理上分： 基因矫正 (gene correction) 基因置换 (gene replacement) 基因增补 (gene augmentation) 基因失活 (gene inactivation) n n n n n n n n n 途径上分： 体内法（in vivo） 体外法（ex vivo） 转入方式上分： 物理方法 化学方法 膜融合法 直接基因治疗 病毒载体法 *