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第14章 分枝杆菌属 主要内容 结核分枝杆菌 牛分枝杆菌 麻风分枝杆菌 非结核分枝杆菌 第一节 结核分枝杆菌(M.tuberculosis) 结核杆菌(tubercle bacilli)是结核病的病原菌,又称抗酸杆菌 可侵犯全身各器官,以肺结核最多见 一、生物学性状 1、形态与染色 细长略带弯曲杆菌 齐-尼(Ziehl-Neelsen)抗酸染色法阳性 细菌被药物诱导成的L型可见球状、丝状等多形性,其染色后抗酸性减弱或消失,在病变组织或标本中可见非抗酸性G+颗粒。 结核杆菌抗酸染色 2、培养特性 专性需氧 营养要求较高,初次分离用Lowenstein-Jensen(罗氏)培养基,内含蛋黄、甘油、马铃薯、无机盐和孔雀绿等。 T 37℃ (30℃~42℃) PH 6.5~6.8 生长缓慢,3~4周后可见颗粒、结节或菜花状,乳白色或米黄色菌落,不透明。 结核杆菌培养 3、生化反应 TB不发酵糖类 可合成烟酸、还原硝酸盐 4、抵抗力(四不怕) 对干燥的抵抗力特别强 结核分枝杆菌对酸(3% HCl或6% H2SO4) 或碱(4% NaOH) 有抵抗力,15min不受影响 对碱性染料有抵抗力 对青霉素等抗生素耐药 4、抵抗力(四怕) 对乙醇敏感 对湿热敏感 对紫外线敏感 对链霉素、异烟肼、利福平、环丝氨酸、乙胺丁醇、卡那霉素、对氨基水杨酸等抗痨药物敏感,但长期用药容易出现耐药性 5、变异性 可发生形态、菌落、毒力、免疫原性和耐药性变异 毒力的变异 卡介苗(BCG)现广泛用于预防接种 耐药性的变异 与病情的迁延与复发有关,故需联合用药 二、致病性 1、致病物质 脂质 蛋白质 多糖 脂 质 索状因子 若将其从细菌中提出,则细菌丧失毒力 磷脂 蜡质D 硫酸脑苷脂 蛋白质 有抗原性,和蜡质D结合后能使机体发生超敏反应 在形成结核结节中发挥一定作用 多 糖 2、所致疾病 感染方式 呼吸道、消化道或损伤的皮肤黏膜侵入机体 所致疾病 疾病种类多样化 以肺结核为最多 肺部感染 原发感染 多发生于儿童 原发综合征 转归 原发后感染 多发生于成人 多为内源性感染 病灶多局限 发生开发性肺结核的机率大 肺外感染 部分患者结核分枝杆菌可进入血液循环引起肺内、外播散,如脑、肾结核 痰菌被咽入消化道或食入了消毒不严格的牛奶也可引起肠结核、结核性腹膜炎等 也可经破损的皮肤感染 大多与结核分枝杆菌L型有关 三、免疫性 1、免疫机制 属胞内感染菌,其免疫主要是以T细胞为主的细胞免疫 结核的免疫属于感染免疫(infection immunity),又称有菌免疫 2、免疫与超敏反应 细胞免疫为主,迟发型超敏反应同时存在 郭霍现象 再感染时溃疡浅、易愈合、不扩散,表明机体已有一定免疫力 但再感染时溃疡发生快,说明在产生免疫的同时有超敏反应的参与 结核分枝杆菌诱导机体产生免疫和超敏反应的物质不同 3、结核菌素试验 是应用结核菌素进行皮肤试验来测定机体对结核分枝杆菌是否能引起迟发性超敏反应(Ⅳ型变态反应)而判定对结核有无免疫力的一种试验 结核菌素试剂 旧结核菌素(old tuberculin,OT) 每0.1ml含5单位 纯蛋白衍化物 (purified protein derivative,PPD) 人结核分枝杆菌制成的PPD-C 卡介苗制成的BCG-PPD 每0.1ml含5单位 试验方法与意义 2种PPD5个单位两前臂皮内注射 48~72h后红肿硬结超过5mm者为阳性≥15mm为强阳性,对临床诊断有意义 阴性反应应考虑以下情况: 感染初期、老年人、严重结核患者或正患其它传染病及获得性细胞免疫低下 应 用 选择卡介苗接种对象和测定卡介苗接种后的免疫效果。结核菌素试验阴性者应接种或补种卡介苗 在未接种卡介苗的人群中作结核杆菌感染的流行病学调查,了解人群自然感染率 作为婴幼儿(尚未接种过卡介苗者)结核病的辅助诊断 测定肿瘤患者的细胞免疫功能 四、微生物学检查法 标本取材 标本的选择根据感染部位 直接涂片镜检 标本直接涂片或集菌后涂片,用抗酸染色 若找到抗酸阳性菌即可初步诊断 浓缩集菌 先集菌后检查,可提高检出率 脑脊液和胸、腹水可直接离心沉淀集菌 痰、支气管灌洗液、尿、粪等污染标本需经4% NaOH处理后离心沉淀 分离培养 结核分枝杆菌生长缓慢,一般需2~4周长成肉眼可见的落菌 动物试验 将集菌后的材料注射于豚鼠腹股沟皮下,3~4周后若局部淋巴结肿大,结核菌素试验阳转,即可进行解剖 观察肺、肝、淋巴结等器官有无结核病变,并作形态、培养等检查 快速诊断 多聚酶链反应(PCR)扩增技术应用于结核分枝杆菌DNA鉴定,每ml中只需含几个细菌即可获得阳性,且1?2d得出结果 操作中需注意实验器材的污染问题,以免出现假阳性 四、防治原则 预 防 近20年国际组织
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