基于脱碱基位点凝血酶的免标记检测-化学工程专业论文.docxVIP

研究生优秀毕业论文 大连理工大学专业学位硕士学位论文摘 大连理工大学专业学位硕士学位论文 摘 要 DNA是染色体的主要组成成分，同时也是遗传信息的载体。然而，细胞内的DNA 不断受到外界或内部因素的干扰。一个细胞每天约产生104个缺嘌呤位点和500个缺嘧啶 位点，简称脱碱基位点，即AP位点。目前，对AP位点的检测蓬勃发展，并已将其应 用于分析检测领域。作为一类特殊的寡核苷酸链，核酸适配体在目标分子识别中有着高 灵敏度与高特异性。 凝血酶是一种非常重要的蛋白酶，具有促凝和抗凝双重功能，是机体凝血系统中重 要的衡量指标。其在调控血栓形成、组织修复中发挥着重要作用。因此，对凝血酶快速、 准确的检测在临床诊断中具有重要意义。 本文在与凝血酶核酸适配体链(Aptl5的3’端延长6个碱基)部分互补的单链DNA 中引入AP位点，设计了含AP位点的双链DNA，即AP．dsDNA。分别以银纳米簇(Ag NCs)和2．氨基．6，7---甲基．4．羟基蝶啶(diMe-pteridine)为荧光探针，基于荧光猝灭 和恢复机理构建了两种免标记的凝血酶检测传感器。 研究发现，AP．DNA的长度对于检测体系有着重要影响，采用长度适宜的AP．DNA 可以提高检测的灵敏度。同时，考察了缓冲溶液、孵育时间、温度等对检测体系的影响。 在优化实验条件的基础上对凝血酶样品进行检测，得到其线性范围。以Ag NCs为荧光