激光散射及其在蛋白质溶液研究中的应用-物理化学学报.PDFVIP

第 13 卷 第3 期 大学化学 1998 年6 月 知识 介绍 李连之 周永洽 ( 南开大学化学系 天津 300071) 简单介绍了激光散射这一现 技术的基本原理, 综述了它在研究蛋白质的分子量、分 子尺寸、形状及构象变化、分子的缔合和聚集等方面的应用。 激光散射技术在生物大分子溶液性质研究方面的应用越来越广泛, 在某些方面如蛋白质 分子的缔合、聚集等研究中是其它手段所无法比拟的。作为经典的静态光散射方法, 它可以 测得大分子的重均分子量M、旋转半径 R g 以及第二维利系数A 2 等重要参数。特别是近十 几年来发展起来的动态光散射方法, 可以测得光强的时间相关函数, 从而可得到大分子的平 均扩散系数D及平均流体力学半径R 。该技术具有不破坏样品所处的环境状态, 能快速跟 h 踪体系的变化过程等优点, 这对于研究生物大分子的溶液状态行为特别适用。 、 [ 1~ 3] 光传播时其交变的电磁场引起介质中分子的电子产生强迫振动, 这种振动成为二次波源 向各个方向辐射电磁波, 这是光散射的起因。当质点或分子的极化率与周围介质的极化率不 同时, 便可观察到散射光。散射光的频率应与入射光的频率相同, 即发生所谓的静态光散 射。但实际上, 介质中的质点或分子在不停地做布郎运动, 由多普勒效应可以知道, 对处于 静止参考体系中的观察者来说, 质点或分子辐射的次波频率与其运动速度有关。质点或分子 的运动有快有慢, 因此频移有个分布范围, 结果是散射光场以入射光频率 为中心而展宽, 0 此时即发生所谓的动态光散射。 O 1. 静态光散射 静态光散射在散射中没有能量转移, 它仅研究散射光强度及其角度依赖性的关系。由于 激光的引入使得经典的静态光散射的仪器简化、实验精度提高, 特别是使得测定高分子稀溶 液的行为得以实现。 对于小粒子( 散射粒子的尺寸小于入射光波长 1/ 20 的分子) 而言, 可以推导出如下的表 达式: H c 1 2 R ( ) = M + 2A 2 c + 3A 3 c + ( 1) 对于生物大分子来说, 除了尺寸比较小的球蛋白分子外, 绝大多数的分子都属于大粒子 ( 即其尺寸接近或大于入射光波长的1/ 20) 。对于它们而言, 可以推导出如下的基本表达式: 2 H c 1 16 2 2 R ( ) = M 1 + 2 R g sin 2 + + 2A 2 c ( 2) w 3 26 式( 1) 、( 2) 中H 为光学常数, R ( ) 为瑞利比, Mw 为重均分子量, A 2 为第二维利系数, c 为浓度, 为波长, R g 为旋转半径, 为散射角。 [ 1] 2 采用Zimm 作图法 进行数据处理可以求得Mw , R g 和A 2 。 2. 动态光散射 与静态光散射不同, 动态光散射是研究粒子的动态行为。它是通过测定散射光中微小频 移及其角度依赖性来得到关于散射质点的动态行为的。只有在激光问世以后, 动态光散射技 术才得以建立和迅速发展起来。此技术适用于约几纳米至1 微米的粒子在1 微秒至1 秒的时 间范围内运动过程的测定。 在动态光散射实验中实际所测得的是归一化的二级光强时间相关函数 g (2) ( ) , 对于符 合高斯分布的光场, 归一化的二级光强时间相关函数和归一化的一级光强