酵母菌培养的培养技术.docxVIP

酵母菌的培养技术 一.酵母菌的培养基的配方 1.麦芽汁培养基的配制 培养基成分:新鲜麦芽汁一般为10-15波林。 配制方法:(1)用水将大麦或小麦洗净，用水浸泡6-12h，置于15℃阴凉处发芽，上盖纱布，每日早、中、晚淋水一次，待麦芽伸长至麦粒的两倍时，让其停止发芽，晒干或烘干，研磨成麦芽粉，贮存备用。 (2)取一份麦芽粉加四份水，在65℃水浴锅中保温3-4h，使其自行糖化，直至糖化完全(检查方法是取0.5ml的糖化液，加2滴碘液，如无蓝色出现，即表示糖化完全) (3) 糖化液用4-6层纱布过滤，滤液如仍混浊，可用鸡蛋清澄清(用一个鸡蛋清，加水20 m1，调匀至生泡沫，倒入糖化液中，搅拌煮沸，再过滤)。 (4)用波美比重计检测糖化液中糖浓度，将滤液用水稀释到10-15波林，调pH至6.4。如当地有啤酒厂，可用未经发酵，未加酒花的新鲜麦芽汁，加水稀释到10-15波林后使用。 (5)如配固体麦芽汁培养基时，加入2％琼脂，加热融化，补充失水。 (6)分装、加塞、包扎。 (7)高压蒸汽灭菌100 Pa灭菌20 min。 2.马铃薯葡萄糖培养基的配制 培养基成分:马铃薯20g 葡萄糖2 g 琼脂1.5-2g 水100ml 自然pH 配制方法:(1)配制20％马铃薯浸汁取去皮马铃薯200g，切成小块，加水1000m1。80℃浸泡lh用纱布过滤，然后补足失水至所需体积。100 Pa灭菌20 min。即成20％马铃薯浸汁，贮存备用。 （2)配制时，按每100 m1马铃薯浸汁加入2g葡萄糖，加热煮沸后加入2g琼脂，继续加热融化并补足失水。 (3)分装、加塞、包扎。 (4)高压蒸汽灭菌100 Pa灭菌20 min。 3.豆芽汁葡萄糖培养基的配制 培养基成分:黄豆芽 10g 葡萄糖 5g 　琼脂 1.5～2g 水 100ml 自然pH 配制方法 :（1）称新鲜黄豆芽10g，置于烧杯中，再加入100ml水，小火煮沸30min，用纱布过滤，补足失水，即制成10％豆芽汁。 （2）配制时，按每100ml10％豆芽汁加入5g葡萄糖，煮沸后加入2g琼脂，继续加热融化，补足失水。 （3）分装、加塞、包扎。 （4）高压蒸汽灭菌100Pa灭菌20min。 4.蔡氏（Czapck）培养基的配制 培养基成分:蔗糖 3g 　　NaNO3 0.3g 　　K2HPO4 0.1g 　　KCl 0.05g 　　 MgSO4?7H2O 0.05g 　 FeSO4 0.001g 　　琼脂 1.5～2g 　　蒸馏水 100ml 　　自然pH 　 配制方法 :（1）称量及溶化 量取所需水量约2/3左右加入到烧杯中，分别称取蔗糖、NaNO3、K2HPO4、KCl、MgSO4。依次逐一加入水中溶解。按每100ml培养基加入1ml0.1％的FeSO4溶液。 （2）定容 候药品全部溶解后，将溶液倒入量筒中，加水至所需体积。 （3）加琼脂 加入所需量琼脂，加热融化，补足失水。 （4）分装、加塞、包扎。 （5）高压蒸汽灭菌100Pa灭菌20min。 5.YPD培养基的配制 YPD 或YPED，：Yeast Extract Peptone Dextrose Medium(1L)，又叫酵母浸出粉胨葡萄糖培养基，加入琼脂的又叫酵母膏胨葡萄糖（YPD）琼脂培养基用于酵母菌的培养 配方：1% Yeast Extract（酵母膏） 2% Peptone（蛋白胨） 2% Dextrose (glucose)（葡萄糖），若制固体培养基，加入2%琼脂粉 配制方法：（1） 溶解10gYeast Extract（酵母膏）, 20gPeptone（蛋白胨）于900ml水中，如制平板加入20g琼脂粉 (2) 高压121度20min (3) 加入100ml 10×Dextrose (glucose)（葡萄糖）,葡糖糖溶液灭菌后加入 注：葡萄糖，yeast extract ,peptone溶液混合后在高温下可能会发生化学反应，导致培养基成分变化，所以要分别灭菌后再混合。 YPEG：除了用3%乙醇和3%甘油代替葡萄糖作为碳源外，其他成分同YPD 二.酵母菌的培养条件 营养：酵母菌同其它活的有机体一样需要相似的营养物质，像细菌一样它有一套胞内和胞外酶系统，用以将大分子物质分解成细胞新陈代谢易利用的小分子物质，属于异养生物。 酸度：酵母菌能在PH值为3.0～7.5的范围内生长，最适PH值为4.5～5.0。 水分：像细菌一样，酵母菌必须有水才能存活，但酵母需要的水分比细菌少，某些酵母能在水分极少的环境中生长，如蜂蜜和果酱，这表明它们对渗透压有相当高的耐受性。 温度：在低于水的冰点或者高于47℃的温度下， 酵母细胞一般不能生长，最适生长温度一般在20～30℃。