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对于微生物发酵法生产紫杉醇的探究 摘要：紫杉醇是目前公认的广Abstract：Paclitaxel is generally accepted as one of the anti-cancer drugs that are Broad-spectrum and has strong activity. To extract paclitaxel from the yew roots, bark of the yew ，which is in danger of becoming extinct, is the main way used to produce paclitaxel so far， which has great environmental impact. However，there is the other way to produce paclitaxel that has a broad prospect. It’s called microbial fermentation technology，which is environmental friendly and efficient. Key words：Paclitaxel， Taxol， Microbial fermentation， Endophytic fungi，Production （一） 紫杉醇（paclitaxel，商品名Taxol是豆杉植物的皮中提出的一的次生代物二Wani 等（1）于1971 年从短枝红豆杉(Taxusbreviifolia) 树皮中分离得到的。随后,Schiff 等（3） 证实紫杉醇具有独特的抗癌机制。它是目前所了解的惟一一可以促微管聚合和定已聚合微管的物广具有“冻结”有G2期和M期，直至死亡。紫杉醇也作用于巨噬(TNF)受体，促使(IL)-1、TNF-2、IL-6、干(IFN)-1、IFN-2(LPS) 的作用,可调节机体的免疫功能（6）。因此，紫杉醇对癌细胞有一定的杀伤力，对正常细胞的伤害作用较小，并且对于多种临床恶性肿瘤疗效突出，在众多的抗肿瘤药物中鹤立鸡群（尤其是对普通抗癌药物无能为力的某些晚期肿瘤）。美国食品与药物管理局（FDA）于1999年12月正式批准紫杉醇用于临床。（7）（8）（9） 此外，紫杉醇在有治 生产紫杉醇的方法有：红豆杉树皮直接提取法、化学半合成法、化学全合成法、微生物发酵法及红豆杉细胞培养法。其中，目前的化学全合成法步骤太多，合成原料昂贵，产出率低；微生物发酵法和红豆杉细胞培养法的还在实验室阶段。因此，目前国际市场上的紫杉醇主要从红豆杉树皮提取及半合成,迄今为止尚未见有第三种形式形成大规模工业化生产的报道。（10）由于红豆杉是濒临灭绝的珍稀植物，且生长缓慢，加之紫杉醇在树皮中的含量极低,导致了紫杉醇长期供不应求，价格居高不下，堪比黄金。 （二） 1993年，美国Montana州大学植物病理系的stierle博士等（11）从短叶红豆杉（ T.brevifolia）的韧皮部中分离得到一种能产生紫杉醇的内生真菌安德鲁紫杉菌（Taxomyces andreanae）。Stierle等（12）采用质谱（MS）、免疫化学、色谱（TLC、HPLC）和放射性同位素标记等方法，证明了安德鲁紫杉菌的3周培养物中存在紫杉醇及其类似物。（9）能合成紫杉醇的红豆杉内生真菌的发现，为紫杉醇的生产开拓了一条崭新的道路。 目前的微生物发酵技术已较为成熟，可大规模应用到工业生产中，此外，微生物育种和选育都快于植物细胞，而且微生物诱变也较植物细胞容易，因此，微生物发酵法生产紫杉醇不但能保Stierle 和 Strobel 等（13）在短叶红豆杉( T. brevifolia)的枝条上分离到一种内生真菌,能够产生紫杉醇,定名为安德列亚霉( Taxomyces andreanae)。此后,各国学者陆续从西藏红豆杉、云南红豆杉、东北红豆杉、欧洲红豆杉、中国红豆杉中分离到产紫杉醇的内生真菌,其宿主植物几乎涉及红豆杉属的各个种。例如，1993 年周东坡（14）领导的课题组从百年以上的东北红豆杉( T. cuspidata) 的枝条与树皮中分离到3 株（其中2 株菌被鉴定为树状多节孢( Nodulisporiumsylviforme) ,为我国的新记录属）可产紫杉醇的内生真菌,产量不高，为51.06-125.70μg/L。1994 年，邱德友等（15）从云南红豆杉( T.yunnanensis) 的树皮中分离到80 多株真菌,其中一株YFI，形态很类似于Stierle发现的安德鲁紫杉菌，经过TLC 分析测定亦可产生紫杉醇，但是生物合成量很低。1996年，Strobel（16）等从西藏红豆杉中分离到一株产生紫杉醇的内生真菌小