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【解析】 根据步骤中选择了不同的材料,在不同条件下的处理,可判断出本实验的目的是探究不同材料和不同条件对DNA提取量的影响,是DNA粗提取与鉴定实验的应用;缓缓搅拌能够有效防止因DNA断裂而影响实验结果;结论可以从表格得到的提取量得出,低温下获得的DNA含量较多是因为低温抑制了相关酶的活性,使DNA降解速度减慢;依据氯仿的特性,可以在第三步获得的溶液中加入等量氯仿,静置并吸取蛋白质含量较少的DNA上清液,获得纯度更高的DNA。 【答案】 (1)探究不同材料和不同保存温度对DNA提取量的影响 (2)DNA断裂 (3)①等质量的不同实验材料,在相同的保存温度下,从蒜黄提取的DNA量最多 ②低温抑制了相关酶的活性,DNA降解速度慢 (4)将第三步获得的溶液与等量的氯仿充分混和,静置一段时间,吸取上清液 随堂即时巩固 专题质量评估 核心要点突破 高考热点示例 随堂即时巩固 上页 下页 专题八 生物技术实践 专题质量评估 第2讲 酶的应用和生物技术在其他方面的应用 1.植物的组织培养。 2.酶的存在和简单制作方法。 3.酶活性测定的一般原理和方法。 4.酶在食品制造和洗涤等方面的应用。 5.制备和应用固定化酶。 6.PCR技术的基本操作和应用。 7.蛋白质的提取和分离。 考纲点击 核心要点突破 要点一 植物组织培养 1.原理:植物细胞全能性。 全能性高低: 要点二 酶的研究与应用 1.果胶酶在果汁生产中的应用 (1)果胶酶的作用 ①植物细胞壁及胞间层的主要组成成分之一是果胶。果胶是由半乳糖醛酸聚合而成的一种高分子化合物。 ②果胶酶的作用是分解果胶变成可溶性的半乳糖醛酸。 (2)酶的活性与影响酶活性的因素 ①酶的活性是指酶催化一定化学反应的能力。酶促反应速率用单位时间内、单位体积中反应物的减少量或产物的增加量表示。 ②影响酶活性的因素有温度、pH和酶的抑制剂等。 (3)果胶酶的用量 生产果汁时,为了使果胶酶得到充分利用,节约成本,需要控制好酶的用量,用量多少常通过实验手段探究。 2.影响酶活性的因素、酶的用量及应用实验探究时注意的问题 (1)实验设计时要遵循单一变量和对照两大原则,严格控制无关变量。 (2)探究不同温度(或pH)对酶活性的影响时,温度(或pH)作为自变量,通常通过设置合理的梯度来确定最适值。最适值是通过比较相同时间内获得的反应物的量或效果来确定的。 温度和pH在很大程度上对酶的构象会产生巨大的影响,过高或过低都会使其失去活性,其曲线如图: (3)探究最适温度时,pH为不变量,探究最适pH时,温度最好为最适温度。 (4)探究果胶酶的最适用量时,所测出的最适用量指本实验的温度、pH等条件下测出的,因而果胶酶的最适用量应标明温度和pH。 (5)探讨加酶洗衣粉的最适温度要根据生活中的实际情况,合理设置温度梯度。 (6)在使用加酶洗衣粉时不但要考虑最佳洗涤效果条件,还要考虑到酶的专一性和洗涤成本的问题。 3.酵母细胞的固定化 (1)固定化酶和固定化细胞是利用物理或化学方法 将酶或细胞固定在一定空间内的技术,包括包埋法、化学结合法和物理吸附法。 (2)配制海藻酸钠溶液时要用酒精灯加热,加热时要用小火,或者间断加热,反复几次,直到海藻酸钠溶化为止。 (3)固定化酶和固定化细胞技术的比较 要点三 DNA的粗提取与鉴定 1.材料准备:本实验用鸡血细胞作实验材料有两个原因:①鸡血细胞核的DNA含量丰富,材料易得;②鸡血细胞极易吸水涨破,而用动物肝脏细胞作实验材料常常需要匀浆和离心,对设备要求较高,操作繁锁,历时较长。 2.DNA的粗提取和鉴定 步骤 操作 原理 破碎细胞,释放DNA 加入20 mL蒸馏水,搅拌5 min,用1~2层纱布过滤备用 使细胞吸水涨破 溶解细胞核中的DNA 加入2 mol/L的氯化纳溶液40 mL,搅拌1 min DNA在高浓度氯化钠溶液中,溶解度最大 步骤 操作 原理 DNA的析出 加入蒸馏水约300 mL,不停地进行均匀搅拌,然后用3~4层纱布过滤混合液 降低氯化钠浓度,使DNA的溶解度降到最低 DNA的初步提纯 加入2 mol/L的氯化钠溶液20 mL,不停地搅拌,然后用1~2层纱布过滤混合液 步骤 操作 原理 DNA的再次提纯 加入95%冷酒精50 mL,然后进行搅拌 浓缩沉淀DNA DNA的鉴定 向两支试管中分别加入2 mL二苯胺试剂,然后将试管在沸水浴中加热5 min,比较试管中的颜色变化。(注:二苯胺溶液要现用现配,否则会影响鉴定效果) 沸水浴中DNA遇二苯胺试剂呈蓝色 要点四 血红蛋白的提取 1.凝胶色谱法:根据相对分子质量的大小分离蛋白质。 2.电泳技术:在电场的作用下,利用待分离样品中各种分子带电性质以及分子本身大小、形状等性质的差异,使带电分子产生不同的迁移速度,从而达到对样品进行分离、鉴定或提
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