利用crisprcas9技术构建atf4基因敲除的hepg2细胞株.pdfVIP

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2019-04-08 发布于天津
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利用crisprcas9技术构建atf4基因敲除的hepg2细胞株.pdf

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广西医科大学学报 ; () 2018Ma 355 y JOURNALOFGUANGXIMEDICALUNIVERSITY ·603· 利用 / 技术构建基因 CRISPRCas9 ATF4 敲除的HeG2细胞株* p 1 1△ 2△ , , 易桥勇王秋雁李天宇 ( , ; , ) 广西医科大学基础医学院南宁广西医科大学第一附属医院南宁 1. 5300212. 530021 : / , 。 : 摘要目的运用基因编辑技术建立基因敲除的细胞株方法针对基因作用的功能区 CRISPRCas9 ATF4 HeG2 ATF4 p , ( ) ( ) 。域设计靶向基因外显子和外显子的两对构建重组质粒并转化 ATF4 Exon1 1 Exon2 2 RNA PX459-ATF4-RNA g g , , 。 DH5α感受态细胞筛选出重组子后进行测序通过测序验证所设计的 RNA的有效性将 PX459-ATF4-RNA质粒转染到 g g , , , , 。 HeG2细胞中挑选单克隆细胞提取 DNA 进行 PCR检测与基因测序获得敲除 ATF4基因的细胞株通过 westernblot- p 。 : tin 检测筛选出来的 HeG2细胞 ATF4基因的敲除效果结果菌落 PCR与菌液测序结果显示 PX459-ATF4-RNA载体构 g p g 建成功; 扩增电泳与基因测序检测显示成功构建成了基因敲除的细胞; 检测结果显示单克 PCR ATF4 HeG2 westernblottin