动物细胞培养和核移植技术(上课用).pptVIP

动物细胞培养和核移植技术 第一课时 动物细胞工程常用的技术手段： 动物细胞培养、 动物细胞核移植、 动物细胞融合、 单克隆抗体 动物细胞培养技术是其他动物细胞工程技术的基础。 提问： 植物细胞工程常用的技术手段有哪些？ 植物组织培养, 植物体细胞杂交 一、动物细胞培养 原理： 1、动物细胞培养过程 细胞增殖 （有丝分裂） 2．2．1 动物细胞培养和核移植技术 从动物机体中取出相关组织，将它们分散成单个细胞，然后放在适宜的培养基中，让这些细胞生长和增殖。 一、动物细胞培养 1 、动物细胞培养的概念 动物胚胎或幼龄动物的组织、器官（剪碎） 细胞悬浮液 无限增殖（细胞发生突变） 单个细胞 培养瓶中培养 培养液 稀释制备 原代培养 传代培养 胰蛋白酶或胶原蛋白酶 出现贴壁生长，接触抑制 约10代以内细胞（正常的二倍体核型） 约10-50代细胞（部分细胞核型改变） 胰蛋白酶 细胞 悬浮液 细胞贴满瓶壁 50代 细胞 原代 培养 传代 培养 ⑴原代培养: 将动物组织经胰蛋白酶等处理后的初次培养。 ⑵传代培养: 对贴满瓶壁的细胞用胰蛋白酶处理，然后再分瓶继续培养。 动物组织 单个细胞 细胞悬液 贴壁生长 分瓶培养 10代细胞 50代细胞 不死细胞 原代培养 传代培养 胰蛋白酶或胶原蛋白酶 剪碎 加培养液 接触抑制 少数癌变 少数 动物细胞培养技术流程 失去接触抑制现象 细胞核型不变 当贴壁细胞生长到表面相互接触时，细胞就会停止分裂增殖—细胞出现接触抑制。 哪些细胞失去了接触抑制？ 传代培养时，少数超过50代的细胞，由于遗传物质发生改变，可无限增殖，并失去了接触抑制——肿瘤细胞。 ⑶接触抑制 动物胚胎或幼龄动物的组织、器官 细胞悬浮液 胰蛋白酶 10代细胞 50代细胞 细胞株 无限传代（不死性） 细胞系 遗传物质改变 遗传物质未改变 例1、正常细胞在分裂时，只要和相邻细胞接触，就停止活动，不再分裂。这一现象称为“接触抑制”。对这一事实的有关推测，正确的有 （ ） A．动物体细胞培养过程中，在遗传物质发生变化以后，只能形成单层细胞。 B．癌细胞在体外培养时，不可能成为隆起的多层细胞。 C．癌细胞不受“接触抑制”，这可能与它的细胞表面发生变化有关。 D．单细胞生物分裂产生的子细胞，彼此间也存在“接触抑制” 。 C 多细胞生物的细胞膜上存在着糖蛋白，细胞之间的信息识别功能使细胞间存在“接触抑制”。单细胞生物分裂产生的子细胞，能独立进行生命活动，不存在“接触抑制”。 4、动物细胞培养条件： 1、无菌、无毒的环境 （添加一定量的抗生素，定期更换培养液） 2、营养 （葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素、动物血清等。） 3、温度和PH 36.5+（-）0.5度, 7.2-7.4 4、气体环境： O2和CO2（95%空气和5% CO2 ） O2是细胞代谢所必需的，CO2的主要作用是维持培养液的pH。 保证细胞顺利的生长增殖 维持培养液的PH 4、应用 ①、生产生物制品（病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体）。 ②、作为基因工程中的受体细胞。 ③、培养正常细胞或各种病变的细胞，用于生理、病理、药理等方面的研究。 ④、培养的动物细胞可以用于检测有毒物质，判断某种物质的毒性。检测有毒物质毒性大小，原理是动物细胞经该物质处理后，根据变异率判断（畸变细胞所占的比例越大，说明该物质毒性越大）。 思考： 2、为什么选用动物胚胎或幼龄个体的器官或组织做动物细胞培养材料？ 1、动物细胞培养液的主要成分是什么？较植物组培培养基有何独特之处？ 3、为什么培养前要将组织细胞分散成单个细胞？ 4、动物细胞培养能否像绿色植物组织培养那样最终培养成新个体？ 主要成分：葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素和动物血清等。独特之处有：1、液体培养基 2、成分中有动物血清等 因为这些组织或器官上的细胞生命力旺盛，分裂能力强 成块组织不利培养，分散了做成细胞悬浮液利于培养 不能，动物细胞培养只能使细胞数目增多，不能发育成新的动物个体 小结：植物组织培养和动物细胞培养的比较 比较项目 植物组织培养 动物细胞培养 原理 细胞的全能性 细胞增殖 培养基性质 固体培养基 液体培养基 培养基特有成分 蔗糖 植物激素 葡萄糖 动物血清 培养结果 植物体 细胞株、细胞系 培养目的 快速繁殖、培育无病毒植株 获得细胞或细胞分泌蛋白 二.动物细胞核移植技术和克隆动物 将动物的一个细胞核，移入一个已经去掉细胞核的卵母细胞中，使其重组并发育成为一个新的胚胎，这个新的胚胎最终发育为动物个体（克隆动物）。 分 类 胚胎细胞核移植： 体细胞核移植： 细胞分化程度低，恢复全能性容易； 细胞分化程度高，恢