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2019-03-30 发布于天津
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hiv-1cap2nc蛋白的表达及体外自组装.pdf

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586 生物工程学报白诗梦等/HIV-1 CAP2NC 蛋白的表达及体外自组装 Chinese Journal of Biotechnology /cjbcn Apr. 25, 2018, 34(4): 586−593 DOI: 10.13345/j.cjb.170380 ©2018 Chin J Biotech, All rights reserved ·生物技术与方法· HIV-1 CAP2NC 蛋白的表达及体外自组装 1 2 2 1 1 2 2 1,2 白诗梦，张芝晴，乔佳明，沈鸿霖，黄芳，高双全，李少勇，李少伟， 1,2 1,2 夏宁邵，顾颖 1 厦门大学生命科学学院国家传染病诊断试剂与疫苗工程技术研究中心，福建厦门 361102 2 厦门大学公共卫生学院分子疫苗学和分子诊断学国家重点实验室，福建厦门 361102 白诗梦, 张芝晴, 乔佳明, 等. HIV-1 CAP2NC 蛋白的表达及体外自组装. 生物工程学报, 2018, 34(4): 586–593. Bai SM, Zhang ZQ, Qiao JM, et al. Expression and self-assembly of HIV-1 CAP2NC protein. Chin J Biotech, 2018, 34(4): 586–593. 摘要: 构建并表达 HIV-1 CAP2NC 蛋白，探索其体外自组装条件。通过 PCR 技术扩增 HIV-1 (NL4-3 毒株) CAP2NC 基因片段，并将其连接到原核表达载体 pTO-T7 ，获得重组质粒 pTO-T7-CAP2NC ，然后转化至大肠杆菌BL21 (DE3) 菌株，经疏水层析纯化后获得重组蛋白CAP2NC 。SDS结果表明，重组蛋白CAP2NC 可在大肠杆菌可溶高效表达，经纯化后纯度约为95% 。ELISA 检测表明重组蛋白 CAP2NC 可被HIV-1 衣壳蛋白特异性单克隆抗体识别，具有较好反应活性。重组蛋白透析后在非原性SDS中呈现为多种聚体形式。分子筛排阻层析分析CAP2NC 蛋白透析后可进行组装，负染电镜进一步观察显示 CAP2NC 蛋白在 RNA 存在条件下，可形成空心管状颗粒，其形态结构与HIV-1 病毒衣壳体外自组装形成的类似。上述结果表明HIV-1 CAP2NC 蛋白具有体外自组装的性质，为进一步在体外研究非成熟病毒样颗粒结构奠定基础。关键词: HIV-1 ，CAP2NC 蛋白，自组装 Expression and self-assembly of HIV-1 CAP2NC protein 1 2 2 1 1 Shimeng Bai , Zhiqing Zhang , Jiaming Qiao , Honglin Shen , Fang Huang , 2 2 1,2 1,2 1,2 Shuangquan Gao , Shaoy