弓形虫ROP18基因原核表达载体的构建及表达.docVIP

- PAGE 1 - 弓形虫ROP18基因原核表达载体的构建及表达? ?基金项目：海南省自然科学基金“弓形虫MIC8真核表达载体构建及免疫原性研究”（编号：809018）资助。 作者简介：赵焕阁，女，1980年生，硕士，助理研究员，从事热带病原生物学方面研究。Tel：0898E-mail： HYPERLINK mailto: 。 赵焕阁 周松林 黄用豪 郭峻莉 黄凤迎 林映莹 王华 谭光宏 （海南医学院海南省热带病重点实验室，海南 海口 571101） 摘 要：【目的】克隆编码刚地弓形虫ROP18基因,构建原核表达载体pET-ROP18进行体外表达。 【方法】克隆弓形虫ROP18基因，将其插入原核表达载体pET-28a中构建重组质粒pET-ROP18，转入大肠埃希菌BL21中IPTG诱导，SDS观察重组蛋白表达情况，Western-blot检测重组蛋白的反应原性。【结果】原核表达载体构建成功，重组蛋白在37℃1mmol/LIPTG诱导4h条件下表达量最大，Western-blot分析结果表明重组蛋白具有一定的反应原性。【结论】 关键词：弓形虫；ROP18；原核表达 Construction of prokaryotic expression vector and expression of Toxoplasma gondii ROP18gene ZHAO HUAN-GE ZHOU SONG-LIN HUANG YONG-HAO GUO JUN-LI HUANG FENG-YING LIN-YIN YING WANG-HUA TAN GUANG-HONG (Key Laboratory for Tropical Diseases, Hainan Medical College, Haikou 571101) Abstract：【Objective】To clone the ROP18 gene from Toxoplama gondii and construct prokaryotic expression vector pET-ROP18 to express on BL21 strain.【Methods】ROP18 gene fragment was amplified by PCR and insert into pET-28a vector to form the recombinant plasmid pET-ROP18,The recombinant plasmid pET-ROP18 was transformed into E.coliBL21 and induced with IPTG.The expression situation of recombinant protein was analysis by SDS. Its reactionogenicity was examined by western-blot analysis.【Results】The prokaryotic expression vector pET-ROP18 was successfully constructed, recombinant protein high level expression was found at 1mmol/L IPTG condition after incubation at 37℃ for 4h. Western-blot analysis show the recombinant protein has been expressed with reactionogenicity.【Conclusion】The prokaryotic expression vector pET-ROP18 was successfully constructed and Keywords：Toxoplasma gondii;rhoptry protein18 (ROP18); prokaryotic expression; 弓形虫是一种世界性分布的专性细胞内寄生原虫，可感染包括人类在内的所有哺乳动物，引起人兽共患寄生虫病。孕妇和免疫功能低下者感染弓形虫造成的危害尤为严重。近年来，弓形虫疫苗和免疫保护性研究已逐渐引起了重视，并认为疫苗接种可能是预防弓形虫病的最佳策略[1]。弓形虫棒状体蛋白由虫体前端的分泌器官棒状体分泌，在虫体入侵细胞时具有非常重要的作用，尤其与纳虫泡的形成有密切关系[2] ，在人体和动物实验感染中具有较强的免疫反应性和免疫原性。ROP18属于ROP2蛋白家族，具有丝/苏氨酸激酶活性，是决定弓形虫毒力强弱的关键性因子[2]，ROP18也是弓形虫体