苦参碱对SGC-7901 和ECV304 细胞增殖活性的影响.docVIP

苦参碱对SGC-7901 和ECV304 细胞增殖活性的影响-经济 苦参碱对SGC-7901 和ECV304 细胞增殖活性的影响 赵健凯 王淑静 王镜伊 乔玉阁 黄蓉 杨子文 摘要：通过体外实验研究苦参碱对人胃癌细胞株(SGC-7901)及人脐静脉内皮细胞(ECV-304)增殖活性的影响，进而研究苦参碱的抗肿瘤活性。本实验对胃癌细胞和内皮细胞进行培养，并用不同浓度的苦参碱对两种细胞进行处理、观察，采用MTT比色法、生长曲线法比较这两种细胞的存活率。结果显示：苦参碱对于人胃癌细胞(SGC-7901)具有明显的抑制作用，加药后的第一天开始人胃癌细胞(SGC-7901)增殖受到抑制，细胞数量减少，而对ECV-304抑制作用不明显，说明苦参碱对肿瘤血管作用较弱，主要通过抑制胃癌细胞增殖而实现其抗肿瘤作用。 关键词：胃癌苦参碱细胞增殖 基金项目：哈尔滨商业大学大学生创新创业训练计划国家级项目，项目编号201410240006. 由于全球自然环境的恶化，人们生活作息的改变，恶性肿瘤的发病率逐年升高，因恶性肿瘤而引起的死亡人数居所有疾病死亡人数的第二位，仅次于心脑血管疾病。在全世界范围内的恶性肿瘤中，胃癌则最为常见。在中国，其发病率以及死亡率均占全部恶性肿瘤之首。现代药理学研究发现苦参碱具有镇痛，强心，抗心律失常，抗病毒，抗炎，抗肿瘤，消肿利尿，免疫抑制和抗菌杀虫等广泛的药理活性。因而在临床上被广泛应用，苦参碱的浓度和作用时间不同，对胃癌细胞的增殖和凋亡具有不同的影响。药物浓度越高、作用时间越长，都会增加细胞凋亡的几率。本实验采用不同时间、不同剂量的苦参碱研究其对胃癌细胞和血管内皮细胞的影响，对进一步研究苦参碱的抗肿瘤活性及机制具有一定的指导意义。 1、实验材料 1.1药品与试剂 苦参碱（纯度≥99%）购自成都曼斯特生物科技有限公司；RPMI1640培养液、胎牛血清、胰蛋白酶购自Invitrogen公司；溴化四氮唑蓝（MTT），台盼兰购自Sigma公司；二甲基亚砜（DMSO）分析纯购自天津市博迪化工有限公司。 1.2细胞株 人胃癌细胞株(SGC-7901)，人脐静脉内皮细胞株（ECV304）哈尔滨商业大学药学院保存。 2、实验方法 2.1MTT比色实验 将对数生长期人胃癌细胞SGC-7901及人脐静脉内皮细胞ECV-304用PBS漂洗2次，去除漂浮在培养基中的细胞，0.25%胰蛋白酶室温消化，用细胞计数板计数，调整细胞的浓度为5×104个/ml。将细胞悬液加到96孔板中，每孔加入100μl细胞悬液，置于37℃，5%CO2培养箱中继续培养24h。将苦参碱以每孔100μl的体积加入到预先设计好的96孔板中，终浓度梯度为0μgml-1，100μgml-1，200μgml-1，400μgml-1，800μgml-1，每个浓度设3个复孔，空白对照孔加入同等体积的不含血清的培养基，37℃，5%CO2培养箱中继续培养48h后，各孔加入10μl浓度为5mgml-1的MTT，置于37℃，5%CO2培养箱中继续培养4h。吸弃含有MTT的细胞培养液，每孔加入100μl二甲基亚砜（DMSO）溶液（避光）。用酶标仪在波长为490nm下测定96孔板每孔的吸光度值。取平均值，计算细胞存活率。 细胞存活率=各给药组吸光度值/空白对照组吸光度值×100%。 2.2生长曲线 将对数生长期的人胃癌细胞SGC-7901及人脐静脉内皮细胞ECV-304用PBS漂洗2次，去除漂浮在培养基中的细胞，然后加入适量浓度为0.25%胰蛋白酶室温消化，调整细胞的浓度为5×104个/ml。向24孔板加入制备好的细胞悬液，每孔加入400μl细胞悬液，于37℃，5%CO2培养箱中继续培养24h。吸弃旧培养液，各孔重新加入培养液。细胞分两组，对照组各孔加400μl无血清培养基，实验组各孔加浓度为500μgml-1的苦参碱400μl，在37℃，5%CO2培养箱中继续培养24h。取出24孔板，每天对照组、实验组各取3个孔，在超净工作台中用PBS漂洗2次，在加入0.25%胰蛋白酶充分消化后，细胞悬液与0.4%台盼蓝溶液以9:1混合混匀。（终浓度0.04%），光镜下计数。分别多次计数求平均值，持续计数6天。 3、分析与讨论 近年来，我国肿瘤疾病尤其是胃癌的发病率和死亡率均在急剧增加，寻找到合适的药物来解决这一问题是迫在眉睫的。苦参碱作为从植物中提取的天然药物，存在副作用小的优势，从而使得苦参碱备受瞩目，关于它的研究也越来越多。研究表明，苦参碱在很多方面表现出了生物活性和药理作用，其在抗肿瘤活性方面表现尤为突出，因此本文对该药物在抗肿瘤体外活性方面做出了研究。 本实验研究目的是探究苦参碱对胃癌细胞和血管内皮细胞增殖活性的影响，因此选取