3、1菊花的组织培养(自己).pptVIP

指植物的离体部分（包括任何器官、组织、细胞或原生质体），在人工控制的培养基及环境条件（温度及光照）下，得以生长和分化成完整植株的一种无菌培养技术。 （三）、植物组织培养原理： 概念：细胞的全能性是指已分化的细胞具有发育成完整个体的潜能。 原因：是生物体的每一个细胞都含有该物种所特有的全套遗传物质。 什么叫分化？其实质是什么? 什么叫脱（去）分化、再分化？ 愈伤组织的细胞有什么特点？ 如何控制细胞的脱分化与再分化？ · 植物组织培养的基本过程： （五）、影响植物组织培养的因素： 3、不同植物激素使用顺序 4、不同植物激素使用量 接种后的锥形瓶最好放在无菌箱中培养，培养期间应定期消毒。 培养温度控制在18-22℃ 每日用日光灯光照12h 结果分析与评价 （一）对接种操作中污染情况的分析 （二）是否完成了对植物组织的脱分化和再分化 （三）是否进行了统计、对照与记录 （四）生根苗的移栽是否合格 练习 1.答：植物组织培养所利用的植物材料体积小、抗性差，对培养条件的要求较高。用于植物组织培养的培养基同样适合于某些微生物的生长，如一些细菌、真菌等的生长。而培养物一旦受到微生物的污染，就会导致实验前功尽弃，因此要进行严格的无菌操作。 2.答：外植体的生理状态是成功进行组织培养的重要条件之一。生长旺盛的嫩枝生理状况好，容易诱导脱分化和再分化。 * 萧县郝集中学 * 萧县郝集中学 菊花的组织培养 又称：植物离体培养 （二）、植物组织培养的概念 （一）、植物组织培养技术的意义 一、基础知识 植物细胞的全能性 阅读32页解决下列问题： （四）、植物组织培养的基本过程 基因的选择性表达 1、外植体的选取 不同植物的组织培养难度不同 同一种植物的不同组织培养难度不同 2、培养基的配制(MS培养基) 大量元素：C、H、O、N、P、K、Ca、Mg、S 微量元素：B、Mn、Cu、Zn、Fe、Mo、I、Co 有机物：甘氨酸、烟酸、肌醇、维生素、蔗糖等 植物激素：生长素、细胞分裂素、赤霉素等 一般选择未开花植物的茎上部新萌生的侧枝 分化频率提高 同时使用 细胞既分裂也分化 先细胞分裂素， 后生长素 有利于细胞分裂但不分化 先生长素， 后细胞分裂素 实验结果 使用顺序 促进愈伤组织生长 比值适中 促芽分化， 抑根形成 比值低时 促根分化， 抑芽形成 比值高时 结果 生长素/细胞分裂素比值 5、pH、温度、光照（菊花组培） pH=5.8 温度控制在18—22℃ 每日光照12h 6、消毒 在培养的整个过程中，都需要是一个无菌环境 制备MS固体培养基 外植体消毒 接种 培 养 栽 培 二、实验操作 移 栽 冲洗—酒精—无菌水冲洗—氯化汞—无菌水冲洗至少三次之上 配制各种母液 配制培养基 灭毒 （一）制备MS固体培养基 MS培养基包括20多种营养成分，实验室一般使用4℃保存配制好的培养基母液来制备。 1、配制各种母液 ①无机物中大量元素浓缩10倍，微量元素浓缩100倍，常温保存。 ②激素类、维生素类以及用量较小的有机物一般可按1mg/ml的质量浓度单独配制成母液。 ③用母液配制培养基时，需要根据各种母液的浓缩倍数，计算用量。 2、配制培养基 分装到锥形瓶中，每瓶分装50ml或100ml ① 配制培养液 ② 调PH ③培养基的分装 由于菊花的茎段的组织培养比较容易，因此不必添加植物激素。 3、灭菌 分装好的培养基连同其他器械一起进行高压蒸汽灭菌。 1、选材：菊花茎段，取生长旺盛的嫩枝 （二）外植体消毒 2、消毒 ①流水冲洗 菊花茎段用流水冲洗后可加少许洗衣粉，用软刷轻轻刷洗，刷洗后在流水下冲洗20min左右。 ② 酒精处理 用无菌吸水纸吸干外植体表面的水分，放入体积分数为70％的酒精中摇动2－3次，持续6－7s，立即将外植体取出，在无菌水中清洗。 ③消毒液处理 取出后用无菌吸水纸吸干外植体表面的水分，放入质量分数为0.1％的氯化汞溶液中1－2min，取出后在无菌水中至少清洗3次，漂净消毒液。 （三）接种 污染的主要来源是空气中的细菌和孢子，接种室消毒是至关重要的。用70％的酒精喷雾使空气消毒， 酒精或新洁尔灭搽洗工作台并用紫外线照射20分钟。 1、接种室消毒 2、无菌操作要求 操作要在酒精灯火焰旁完成，每次使用器械后，都需要用火焰灼烧灭菌，接种后立即盖好瓶盖。 3、材料的切取和接种 4、接种注意事项 ①每接种一块外植体前，镊子需放入体积分数为75％的酒精溶液中消毒一次，然后在酒精灯火焰上