海星皂甙的分离纯化及其对果蝇生长发育的影响-细胞生物学专业论文.docxVIP

山东师范大学硕士学位论文 山东师范大学硕士学位论文 山东师范大学硕士学位论文 山东师范大学硕士学位论文 独 创 声 明 本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研 究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他 人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得 （注：如没有其 他需要特别声明的，本栏可空）或其他教育机构的学位或证书使用过的材料。与 我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示 谢意。 学位论文作者签名： 导师签字： 学 位 论 文 版 权 使 用 授 权 书 本学位论文作者完全了解 学校 有关保留、使用学位论文的规定，有权保留 并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本 人授权 学校 可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以 采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。（保密的学位论文在解密 后适用本授权书） 学位论文作者签名： 导师签字： 签字日期： 年 月 日 签字日期： 年 月 日 PAGE PAGE 4 目 录 摘要 I ABSTRACT III 第一章 综 述 1 1 海星类化学成分的研究概况 1 1.1 海星类活性物质的研究 2 1.2 昆虫抗药性研究进展 16 第二章 海星皂甙的提取、分离、纯化 18 1 实验材料 18 2 实验仪器和试剂 18 3 实验方法和步骤： 19 3.1 粉碎 19 3.2 甲醇提取 19 3.3 苯脱脂 19 3.4 调节 pH 19 3.5 正丁醇提取 20 3.6 丙酮沉淀 20 3.7 海星皂甙的鉴定 21 3.8 海星皂甙的纯化 26 第三章 海星皂甙的结构鉴定 30 1 实验材料 30 2 实验仪器和试剂 30 3 实验方法与步骤 30 3.1 样品 F-2 结构解析 30 4 实验结果 35 第四章 海星皂甙的活性研究 36 1 海星皂甙抑制果蝇生长发育活性的研究 36 1.1 实验材料 36 1.2 实验仪器和试剂 36 1.3 实验方法和步骤 36 1.4 小结 41 2 海星皂甙抗肿瘤活性检测 41 2.1 实验材料 41 2.2 实验仪器和试剂 41 2.3 实验用液 42 2.4 实验方法和步骤 43 2.5 样品对体外肝癌细胞 HepG2 细胞抑制作用分析结果 44 5 小结 45 讨 论 46 山东师范大学硕士学位论文 山东师范大学硕士学位论文 山东师范大学硕士学位论文 山东师范大学硕士学位论文 PAGE PAGE 6 I I 1 海星皂甙的提取、分离和纯化46 2 海星皂甙的结构解析47 3 海星皂甙溶血实验分析48 4 海星总皂甙的果蝇生长抑制活性分析49 5 海星皂甙对体外肝癌细胞 HepG2 细胞抑制作用结果分析 50 结 论51 参考文献52 发表文章59 致 谢61 海星皂甙的分离纯化及其对果蝇生长发育的影响 摘要 海星因为以海参、鲍鱼等海洋珍贵软体动物为食一直以来被视为影响海洋养 殖业的有害动物，近些年来，国内外关于海星中活性成分的提取及其活性研究越 来越多，尤其是海星皂甙的研究，但是关于其抑制昆虫生长发育的研究一直以来 都是个空白。我国沿海的海星资源丰富，但一直以来的研究都无法使海星被人们 大批量的利用，研究一种海星的生物活性使其可以大量的被开发利用应该引起人 们更多的关注。本文主要研究了以下几个方面。 首先，将整体冻干的罗氏海盘车粉碎机粉碎后用改进的甲醇提取法进行浸提， 先用甲醇浸提，再用水饱和的正丁醇进行提取，最终得到海星总皂甙，利用香草 醛-硫酸检测法及其溶血活性对提取出的总皂甙进行初步鉴定。然后用甲醇复溶提 取物后中压柱层析分离，最终得到了 10 个组分，其中 F-2 所得到的峰面积最大， 对这十个组分进行高效液相色谱的分析，F-2 组分的峰型最好，对 F-2 进行进一步 分离纯化后得到较纯的一种化合物 F-2B。 其次，对化合物 F-2 利用高效液相色谱-质谱联用等方法进行结构解析。 最后，对提取出的海星皂甙的活性进行研究。研究海星皂甙对果蝇生长发育 的影响。用提取出的 100μg/mL、50μg/mL、20μg/mL、10μg/mL 的海星皂甙溶液以 及对照组、100μg/mL 的毛地黄皂甙溶液组、DMSO 组配制果蝇培养基对同种条件 果蝇进行饲养，研究其子代果蝇的蛹化和羽化情况。实验证明，与对照组相比， 海星皂甙对果蝇子代的蛹化和羽化都有一定的抑制作用，其抑制活性随培养基中 皂甙的浓度增加而增大，而 DMSO 组则没有抑制活性。其中 100μg/ml 在第七天的 蛹化最大抑制率为 48.9%，在第九天的羽化抑制率为 68.75%