动物源性I型胶原蛋白成分测定聚丙烯酰胺凝胶-中国标准化研究院.DOC

GB/T XXXXX GB/T XXXXX—2012 PAGE \* MERGEFORMAT PAGE \* MERGEFORMAT II PAGE \* MERGEFORMAT 1 GB/T XXXXX GB/T XXXXX – 2012 PAGE \* MERGEFORMAT PAGE \* MERGEFORMAT 3 GB/T XXXXX—201X GB/T XXXXX—201X 中华人民共和国国家标准 ICS 07 ICS 07.080 A 21 动物源性I型 动物源性I型胶原蛋白成分测定 聚丙烯酰胺凝胶电泳法 Determination of the triple helix structural of creatural type Ι collagen——Polyacrylamide gel electrophoresis （征求意见稿） 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局中国国家标准化管理委员会发布201X-XX-XX 发布 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 中国国家标准化管理委员会 发布 201X-XX-XX 发布 201X-XX-XX实施 GB/T××××—201× 前 言 本标准按照GB/T 1.1—2009给出的规则起草。 本标准由中国标准化研究院提出并归口。 本标准起草单位： 本标准主要起草人： GB/T××××—201× PAGE \* MERGEFORMAT1 动物源性I型胶原蛋白成分测定 聚丙烯酰胺凝胶电泳法 1 范围 本标准规定了动物源性I型胶原蛋白成分测定聚丙烯酰胺凝胶电泳法的原理、试剂材料、仪器设备、操作步骤、结果分析。 本标准适用于动物源性I型胶原三股螺旋结构测定。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 9695.23 肉与肉制品羟脯氨酸含量测定 GB/T 23527 蛋白酶制剂 GB/T 6682-2008 分析实验室用水规格和试验方法 GB 601—1988 标准滴定溶液的配制和标定 NYT 1663-2008 乳与乳制品中β-乳球蛋白的测定 聚丙烯酰胺凝胶电泳法 YY/T 1453-2016 组织工程医疗器械产品 Ⅰ型胶原蛋白表征方法 YY/T 0606.6—200* 组织工程医疗产品 第6 部分：I 型胶原蛋白 3 术语与定义 本标准下列术语和定义适用于本文件。 3.1 I 型胶原 type I collagen 在广泛存在于动物体中的一种结构蛋白，起到支撑作用并能聚集成纤维，是胶原纤维组分中的一部分。 4 原理 I型胶原经特异的胶原酶水解，经电泳判断三螺旋结构。 5 试剂材料 除非另有说明，在分析中仅使用确认为分析纯的数据；实验用水应符合GB/T 6682中一级水的规定。 5.1 4 mol/L盐酸溶液 量取36 mL浓盐酸（HCl）注入50mL水中，定容至100mL，混匀，按照GB 601—1988 标准滴定溶液的配制和标定中方法进行标定。 5.2 蛋白酶溶液 精确称取2800 U/mg酶活力的胃蛋白酶，配制成胃蛋白酶量分别为10 000 ~ 20 000 U/g 的溶液。 5.3 0.5 mol/L乙酸 取冰醋酸15mL，加水稀释并定容到500 mL。 5.4 1 mol/L浓缩胶缓冲液贮备液，pH 6.8 称取6.06 g三羟甲基氨基甲烷，加适量水溶解，用盐酸调pH值至6.8，用水定容至50 mL，4 °C下保存。 5.5分离胶缓冲液贮备液，1.5mol/L，pH 8.8 称取9.08 g三羟甲基氨基甲烷，加适量水溶解，用盐酸调pH值至8.8，用水定容至50 mL，4 °C下保存。 5.6 丙烯酰胺单体贮备液 称取14.55 g丙烯酰胺和0.45 g N，N-亚甲基双丙烯酰胺，先用40 mL水溶解，搅拌，直至溶液变澄清透明，再用水稀释至50 mL，过滤，备用。该贮备液在4℃下棕色瓶中可保存一个月。 5.7 100 g/L十二烷基磺酸钠溶液 准确称取5 g 十二烷基磺酸钠，用水溶解定容至50mL，室温保存； 5.8 10%（v/v）N, N, N’, N’-四甲基乙二胺溶液 量取0.10 mL N, N, N’, N’-四甲基乙二胺，加水稀释定容至1.00 mL，贮存于4℃。 5.9 10%（w/v）过硫酸铵溶液 称取0.1 g 过硫酸铵，加入1 mL 的去离子水，将固体粉末彻底溶解，贮存于4℃。另外，使用前配制. 5.10 电极缓冲液，pH 8.3 称取3.0 g三羟甲基氨基甲烷，14.4 g甘氨酸，1.0 g十二烷