海洋类固醇激素降解菌的筛选及其降解特性的初步研究-生物化学与分子生物学专业论文.docxVIP

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汕头大学硕士学位论文 汕头大学硕士学位论文 万方数据 万方数据 摘要 类固醇激素难于降解、可在环境中持久存在,与生物体内类固醇激素受体结 合,影响体内激素的合成、运输、释放和代谢;扰乱内分泌系统、生殖系统及神 经系统的功能;造成机体免疫和生殖等功能的障碍,且在极低的浓度下,就可对 生物体造成危害。探索环境中类固醇激素的降解问题,已成为现今研究热点之一, 其中微生物降解是去除环境中类固醇激素的最有效的方法。而海洋环境中类固醇 激素降解菌研究报道很少,本文从海洋环境中分离、筛选出类固醇降解菌,研究 菌株对类固醇激素的降解能力、降解的中间代谢产物及与降解相关的功能基因, 初步探讨菌株降解类固醇激素的分子机制。获得如下主要结果: 从南海采集环境样品,利用 BOX-PCR 法,筛选类固醇激素降解菌株 31 株, 其中变形菌门γ亚群占 77%,厚壁菌门占 13%,放线菌门占 10%;利用静息态法 测定降解率,分离获得的大多数菌株对于相应的底物都具有一定的降解能力,其 中菌株 M39 对 E2(雌二醇)降解率为 60.33%,菌株 M30 对 T(睾酮)降解率 为 64.04%。 菌株 M39 不具有运动性,可在 37℃、6.5%盐浓度生长;明胶液化、产 H2S、 甲基红实验为阴性,淀粉水解、V-P 实验为阳性;可利用麦芽糖、甘露糖、甘露 醇发生同化反应,不可利用阿拉伯糖、N-乙酰葡萄糖胺、醋酸盐、柠檬酸盐、乳 酸盐。菌株 M30 可在 37℃、6.5%盐浓度生长,明胶液化、产 H2S 为阳性,可利 用阿拉伯糖、麦芽糖、甘露糖、甘露醇、N-乙酰葡萄糖胺发生同化反应。进一步 结合 16S rRNA 基因序列分析结果,推测菌株 M39、M30 可能为新种,分别命名 为 Microbacteriumsp. M39、Brevibacteriumsp. M30。 分析菌株 M39、 M30 对类固醇的降解能力,结果表明菌株 M39 可降解 E2、 T,不可降解 E1(雌酮)、E3(雌三醇)、EE2(乙炔雌二醇),但在有 E2 的 存在下,可降解 E1;菌株 M30 具有 T 的降解能力,但相对于菌株 M39,其降解 能力较弱。 采用 GC-MS,在菌株 M39 降解 E2 的中间代谢产物中,检测到 E1、内酯(5- 羟基-15 甲基-13-杂氧四环[2,7.0.11,15]十七烷基-2(7),2,5-三烯-14 酯)。 采用 2-D 电泳、结合 MALDI-TOF-MS 分析,在菌株 M39 降解 E2 过程中,检测 I 到降解途径中的关键性酶 short-chain dehydrogenase,结合相关文献报道,推测菌 株 M39 降解 E2 的可能代谢途径为:先通过类固醇脱氢酶将 E2 降解为 E1,再在 加氧酶的作用下开 D 环,生成内酯,然后内酯开环,进一步降解,最后通过脂 肪酸β氧化和 TCA 循环降解为二氧化碳和水。 检 测 菌 株 M39 降 解 T 的 中 间 代 谢 产 物 , 发 现 有 AD ( Androst-4-ene -3,17-dione)、ADD(1,4-androstadiene-3,17-dione)、6β-hydroxytestosterone;结合 相关文献报道,推测菌株 M39 降解 T 的途径可能为先降解为 AD,AD 再降解为 ADD,或 T 经过羟基化生成 6β-hydroxytestosterone,进一步降解,最后降解为二 氧化碳和水。 关键词:Microbacteriumsp. M39;Brevibacteriumsp. M30;类固醇激素;生物降 解菌; 海洋环境 II Abstract Steroid hormones were difficult to degrade and long-standing in the environment. It would attaches to the receptor, affecting hormone synthesis、transport、release and metabolism in the body, disrupting the function of the endocrine system、reproductive system and nervous system, and disordered the immune system and reproductive functions. what was more, steroid hormones broke our organism at very low concentrations. To explore the degradatio

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