海水干预诱导人肺泡上皮细胞低氧诱导因子-1α表达的研究-内科学(呼吸病学)专业论文.docxVIP

解放军医学院硕士学位论文 解放军医学院硕士学位论文 PAGE PAGE 2 transcription 子 SWD-ALI seawater drowning induced acute lung injury 海水淹溺急性肺损伤 SW-RDS seawater respiratory distress syndrome 海水型呼吸窘迫综合征 TLRs Toll-like receptors Toll 样受体 TNF-α tumor necrosisi factor 肿瘤坏死因子 α VEGF vascular endothelial growth factor 血管内皮生长因子 作 者：王庆 学科专业：呼吸内科 导 师：冯华松 海水干预诱导人肺泡上皮细胞低氧诱导因子-1α 表达的研究 中文摘要 目的: 建立海水淹溺肺损伤的细胞模型，通过观察海水干预后肺泡上皮细胞 HIF-1α蛋白的表达变化及其与细胞损伤程度、炎性因子表达的相互关系，初 步探讨HIF-1α在SWD-ALI中的可能作用。 方法: 肺泡上皮细胞来源的 A549 细胞系，分为正常对照组(C)和海水处理组(S)。 C 组用新鲜培养基常规培养，S 组经灭菌配方海水孵育 0.5h、1h、2h、4h、 8h。 1、光镜观察瑞氏-吉姆萨染色后细胞形态变化 2、MTT 检测细胞增殖 3、蛋白免疫印记法检测各组细胞 HIF-1α 蛋白的表达 4、放射免疫法检测细胞培养上清液中 TNF-α、IL-6 的含量 结果： 1、海水处理后 A549 细胞失去正常长梭形或多角形形态，细胞变圆、胞 体变小，部分细胞出现核浓缩、深染、核碎裂表现。 2、与对照组相比，海水处理组 A549 细胞的生长曲线发生变化，海水干 预 0.5h、1h 组细胞生长抑制率较对照组比较无统计学差异(P0.05)，海水干 预 2h、4h、8h 组细胞生长抑制率较对照组比较有统计学差异(P0.01)；细胞 生长至 48h 和 72h 时，海水干预 4h 组细胞生长抑制率较 2h 组有统计学差异 (P0.05)，海水干预 8h 组细胞生长抑制率较 4h 组有统计学差异(P0.01)。 3、与对照组相比，HIF-1α 在海水干预 1h 后开始升高，2h 时升高明显 (P0.01)，4h 达高峰(P＜0.01)，此后 HIF-1α 蛋白表达逐渐下降，但仍显著高 于对照组(P＜0.01)。 4、TNF-α 与 IL-6 在海水干预 1h 后开始升高，2h 达高峰(P＜0.01)，4h 及 8h 组较对照组比较无统计学差异。 结论: 1、海水干预导致肺泡上皮细胞发生了不同程度的损伤，海水长时间干预 可导致肺泡上皮细胞生长受抑。 2、海水干预可诱导肺泡上皮细胞 TNF-α、IL-6 的表达，海水干预后肺泡 上皮细胞发生了炎症反应。 3、海水干预可诱导肺泡上皮细胞 HIF-1α 蛋白表达；HIF-1α 及相关基因 表达可能参与了海水干预所致肺泡上皮细胞损伤及炎症反应的过程。 关健词：海水，肺泡上皮细胞，低氧诱导因子-1α，TNF-α，IL-6 本课题由海军后勤科研项目基金资助（No. BHJ08JD06） Expression of hypoxia-inducible factor-1α in alveolar epithelial cells induced by seawater Abstract Purpose: To investigate the possible role of HIF-1α in SWD-ALI by observe the expression of HIF-1α in alveolar epithelial cells and its relationship with the degree of injury and the expression of inflammatory factors after seawater intervention. Methods: Divided the A549 cells which derived from the alveolar epithelial cells into control group(C) and seawater treatment group(S). Group C is conventionally cultured by fresh medium, and group S is cultured by sterilized seawater for 0.5h, 1h, 2h, 4h, 8h. Observe the changes in cell morphology after Wright-Giemsa stain